NanoFil di WPI: sistema di iniezione a tenuta di gas nella ricerca sugli animali
NanoFil™ di WPI è un sistema di iniezione a tenuta di gas, con capacità microlitrica, per la ricerca sui piccoli animali, compatibile con aghi fino a 36 gauge. Il volume morto estremamente ridotto consente iniezioni dirette inferiori al microlitro senza riempimento con olio, mentre una guarnizione brevettata in silicone permette di cambiare rapidamente l’ago riducendo al minimo la perdita di campione. Compatibile con capillari GC/CE e vari tipi di tubi, offre aghi smussati e aghi esclusivi con punta a triplo bisello a 25° (26–36G), che riducono i danni ai tessuti e migliorano la durata. Il sistema è ampiamente utilizzato per iniezioni precise nei tessuti, anche in ambito oftalmico, ed è supportato da kit applicativi e studi sottoposti a revisione paritaria.
NOTA DELL’APP: Confronta la precisione della pressione di compensazione
In qualsiasi laboratorio, disporre delle forniture essenziali è quasi importante quanto avere le attrezzature principali. Scegliere un fornitore affidabile di questi materiali indispensabili è importante quanto poter contare su forniture di qualità quando servono. WPI vuole essere il tuo partner nelle prime fasi della scoperta di farmaci e dispone di un’ampia gamma di forniture per laboratorio, molte delle quali possono essere spedite lo stesso giorno lavorativo. Avere a disposizione diverse forniture pronte per la spedizione ci rende un partner affidabile nella ricerca. Ecco alcuni dei prodotti più richiesti che teniamo disponibili per le tue prossime sperimentazioni.
NOTA APPLICATIVA: Applicazioni comuni del sistema EVOM™ Auto
EVOM™ Auto è l’ultima generazione del sistema WPI per la misurazione automatizzata della resistenza elettrica transepiteliale o transendoteliale (TEER). Basato sulla stessa tecnologia collaudata di EVOM™ Manual e REMS, abbinata a un nuovo array di multielettrodi, un’interfaccia software e un sistema di controllo, offre la soluzione con il flusso di lavoro più rapido, migliorando al contempo la precisione delle misurazioni TEER:
NOTA APPLICATIVA: la tecnologia TEER consente un flusso di lavoro in vitro ottimizzato per la scoperta di farmaci
I modelli in vitro hanno utilizzato due metodi comuni per quantificare le variazioni dell’integrità della barriera endoteliale: la resistenza elettrica transepiteliale/transendoteliale (TEER) e la permeabilità ai composti traccianti.1 La TEER è un metodo non invasivo che quantifica le variazioni della conduttanza elettrica per misurare la confluenza cellulare e l’integrità della barriera. La permeabilità ai composti traccianti utilizza molecole di peso molecolare definito per misurare la capacità di esclusione dimensionale delle barriere cellulari (ad es., FITC-destrano da 4 kDa o FD4).1 Utilizzando il manuale EVOM™ (EVOM-MT-03-01), l’elettrodo TEER EndOhm e supporti permeabili per colture cellulari, questa nota applicativa descrive come valutare in modo non invasivo l’integrità della barriera endoteliale dopo il trattamento con citochine e fornisce un metodo per identificare composti vasoattivi potenzialmente in grado di indurre danni vascolari. Gli studi sulla permeabilità ai composti traccianti vengono associati alla valutazione TEER per chiarire gli effetti del trattamento sia sulle giunzioni intercellulari sia sul trasporto paracellulare (Fig. 1).
NOTA APPLICATIVA: Osservazione della mitosi con Celloger® Mini Plus
Nel processo del «ciclo cellulare», le cellule crescono e si dividono in due cellule figlie geneticamente identiche. È regolato da una complessa via di segnalazione che mantiene l’omeostasi cellulare regolando la divisione cellulare e la duplicazione del DNA1. D’altra parte, poiché le cellule tumorali crescono e si dividono indefinitamente, al di fuori del controllo del ciclo cellulare, si usano farmaci antimitotici per sopprimere la proliferazione anomala delle cellule tumorali2. In particolare, il nocodazolo è noto come un farmaco antimitotico rappresentativo per il trattamento del cancro e ha la caratteristica di alterare la dinamica dei microtubuli durante la divisione citoplasmatica e nucleare3,4.
NOTA APPLICATIVA: Analisi della citotossicità indotta dal nocodazolo utilizzando Celloger® Mini Plus
La citotossicità indica il grado di danno alle cellule causato da sostanze chimiche o fattori fisici. Misurarla mediante un saggio di citotossicità è essenziale per lo sviluppo di farmaci e la ricerca biologica. Le cellule attivano vie di segnalazione complesse che causano diversi processi di morte cellulare, come l’apoptosi, la necrosi e la necroptosi. Tuttavia, la maggior parte dei saggi di citotossicità viene misurata solo al termine dell’esperimento, rendendo difficile studiare la risposta dinamica delle cellule ai farmaci.
NOTA APPLICATIVA: Uso di Celloger® Mini Plus per osservare i cambiamenti morfologici e l’attività fagocitica in una linea cellulare di macrofagi
Poiché i globuli bianchi responsabili della funzione immunitaria sono cellule in sospensione che viaggiano lungo i vasi sanguigni, negli studi di immunologia si usano spesso diverse linee cellulari in sospensione derivate dai globuli bianchi. A differenza delle cellule aderenti, lavorare con cellule in sospensione comporta che anche un lieve spostamento della piastra quando la si posiziona sul microscopio faccia galleggiare le cellule. Oltre ai problemi causati dall’instabilità della temperatura e della CO2, di fatto non è possibile monitorare le cellule in tempo reale con un microscopio tradizionale. Pertanto, per monitorare stabilmente le cellule in sospensione, è essenziale un dispositivo di imaging di cellule vive come Celloger® Mini Plus, che funziona all’interno di un incubatore1. Inoltre, con Celloger® Mini Plus la fotocamera all’interno del sistema si sposta per acquisire immagini delle cellule in più posizioni, mantenendo stabile il campione cellulare, invece di spostare un piano portaoggetti su cui è posizionata la piastra. Quando le cellule in sospensione sono state monitorate sia con Celloger® Mini Plus sia con un microscopio, le immagini acquisite con Celloger® Mini Plus sono risultate più stabili rispetto a quelle ottenute con il microscopio, con il quale diverse cellule risultavano fuori fuoco (Figura 1).
Kit di smorzamento del flusso ridotto per una pompa
È stato utilizzato un BLPR2 calibrato sul LabTrax24T per registrare i risultati. Questo grafico mostra entrambe le pompe sul tubo n. 14 a 50 giri/min, con un ago calibro 22. La portata è stimata in 9 ml/min a 50 giri/min.
Uso di un DAM50 per registrazioni EEG nei roditori
Un amplificatore a basso rumore come il DAM50 è un'ottima scelta per registrare l'EEG nei roditori. Gli amplificatori di WPI sono stati progettati per i ricercatori in biomedicina. Mentre negli amplificatori per biologia è comune un rumore di 20-30μV, gli amplificatori della serie DAM di WPI generano 0.4μV RMS (valore quadratico medio) a 0.1-100Hz. (Equivale a circa 2μV picco-picco.) Questa configurazione mostra un modo per effettuare registrazioni di questo tipo. L'elettrodo RC1 è adatto ai ratti, mentre l'EP1 è più indicato per applicazioni craniche nei topi.
Microiniezione nei pesci zebra con UMP3/Micro4
Guarda come i ricercatori dell’Università di Chicago iniettano pesci zebra adulti usando una micro-siringa NanoFil da 10 μl controllata da un controller Micro4 e una UltraMicroPump III (UMP3-1 include una pompa UMP3 e un controller Micro4
Tecnica di microiniezione nei pesci zebra di JoVE
Chiara Cianciolo Cosentino, dell’Università di Pittsburgh, descrive in questo video JoVE come utilizza le microiniezioni endovenose di larve di pesce zebra per studiare il danno renale acuto. Puoi guardare questo video su JoVE. Tra le attrezzature WPI mostrate in questo video figurano:
Gli strumenti WPI protagonisti di un video JoVE sull’impollinazione incrociata
Gli strumenti chirurgici WPI sono stati recentemente presentati in un video di JoVE che illustra un nuovo metodo per l’impollinazione incrociata delle graminacee.
Microiniezione negli otociti di zebrafish
I ricercatori dell’Università del Michigan utilizzano il PV820 di WPI per iniettare una soluzione di morfolino nel lume della vescicola otica di embrioni di zebrafish di 1 giorno. Quindi utilizzano l’elettroporazione per introdurre morfolini mif e simili a mif nei tessuti in via di sviluppo dell’orecchio interno.
Siringa nanofil per riempimento frontale
In questo video, Mike Pizza mostra come riempire frontalmente una siringa Nanofil usando MicroFil.
NOTA APPLICATIVA: Uso di un microscopio con un apparato stereotassico
Puoi utilizzare lo stereomicroscopio PZMIV con un telaio stereotassico, come mostrato nell'immagine qui sotto. Questa configurazione include un PZMIV-BS. È mostrata la piastra di base con telaio a U (502045), ma la maggior parte dei telai stereotassici può essere utilizzata in questo modo. Scegli un obiettivo per stereomicroscopio che ti lasci ampio spazio di lavoro. Ad esempio, l'obiettivo 0.5X ha una distanza di lavoro di 187mm, mentre l'obiettivo 0.32X ha una distanza di lavoro di 296mm. Puoi anche aggiungere un illuminatore Z-LITE-Z186 . Se necessario, usa un contrappeso da 5 a 10 lb. sulla base del braccio per evitare che il microscopio si ribalti.
NOTA APPLICATIVA: Nozioni di base sulla configurazione per microiniezione
Quando si tratta di configurare sistemi di microiniezione, le possibilità sembrano infinite. Le immagini qui sotto offrono alcuni suggerimenti generali su come configurare il proprio sistema. Tieni presente che molti componenti sono intercambiabili, a seconda delle tue esigenze o preferenze.
NOTA SULL'APP: spiegazione della stimolazione isolata
Il termine stimolazione si riferisce alla somministrazione di energia di qualche tipo a un tessuto biologico al fine di provocare una risposta osservabile.
Sebbene l’energia utilizzata nella stimolazione possa essere chimica, termica, meccanica o elettrica, questa trattazione si concentrerà sulla stimolazione elettrica. La stimolazione elettrica dei tessuti biologici comporta l’applicazione di corrente e tensione al sito di stimolazione. Le due grandezze sono correlate dalla legge di Ohm: