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Misurazione TEER

La resistenza elettrica e la resistenza elettrica transepiteliale (TEER) sono la stessa cosa?

No. Otteniamo il valore TEER moltiplicando il valore della resistenza grezza/misurata con un voltmetro epiteliale (come EVOM2) per l’area di crescita cellulare (ad esempio, l’area di un monostrato cellulare coltivato su un inserto per colture cellulari).

Ad esempio, se si coltivano cellule su un inserto per colture cellulari con un’area di 0.5 cm^2.

La lettura della resistenza sul voltmetro epiteliale (ad esempio, EVOM2) mostra un valore di 300 Ω.

TEER= 300 Ω × 0.5 cm^2 = 150 Ω- cm^2

Che cos’è un EndOhm?

EndOhm è una camera progettata per EVOM2, nella quale si inserisce un pozzetto rimovibile per misurare la resistenza. Questa camera ha elettrodi in posizioni fisse e il loro posizionamento e la loro stabilità incidono notevolmente sulla misurazione della resistenza dei tessuti.

Come si usa un EVOM2 per misurare la confluenza?

EVOM2 funziona sul principio che, una volta misurato quello che chiamiamo pozzetto «bianco», questa prima misurazione della resistenza comprende la somma della resistenza degli elettrodi, della distanza tra gli elettrodi e della resistenza dovuta al volume e alla molarità del mezzo liquido. (Le eventuali differenze di carica degli elettrodi vengono annullate dal metodo di misurazione di EVOM2, che inverte la polarità e calcola la media dei risultati.) Le successive misurazioni periodiche del pozzetto tracciano la crescita della membrana tramite misurazioni della resistenza e, una volta che il grafico della resistenza si è stabilizzato, possiamo dire che la membrana ha raggiunto la confluenza. Il sistema EVOM2 funziona proprio come un amplificatore a tensione controllata e un sistema Ussing, ma senza la speciale camera Ussing. Il sistema EVOM2 non è preciso quanto un sistema Ussing, ma il suo scopo è determinare se una membrana è confluita, non eseguire analisi dettagliate. (Con il sistema EVOM2 è possibile studiare alcune caratteristiche della permeabilità della membrana, ma come variazione percentuale anziché come valore assoluto della variazione.)

Perché usare un EndOhm invece di uno STX?

EVOM2 rileverà soprattutto i fori e i vuoti nella membrana, poiché il flusso di elettricità seguirà il percorso di minore resistenza. Gli elettrodi per uso generale STX2 possono flettersi e modificare la distanza tra gli elettrodi; inoltre, il semplice fatto di non tenerli fermi nel pozzetto può causare un errore significativo nella resistenza. Gli elettrodi EndOhm, invece, sono fissi. Se sottoposti a una corretta manutenzione e pretrattati nel mezzo, forniscono misurazioni della resistenza più stabili, ripetibili e affidabili. L’aggiunta degli elettrodi concentrici centrati garantisce inoltre che l’intera area della membrana sia esposta al flusso di corrente elettrica, evitando zone d’ombra dovute al posizionamento sul bordo, che invece possono verificarsi con gli STX2. (Va osservato che il valore TEER di base atteso del tessuto, se è basso, può rendere difficili le misurazioni con membrane di grande area. Per esempio: se il valore TEER è 200Ω-cm2, in un pozzetto da 12mm sarà 1.13 volte inferiore a parità di misurazione su uno strato confluente (176.9Ω). Lo stesso tessuto da 200Ω in un pozzetto di 24mm di diametro avrà un valore 4.52 volte inferiore, pari a 44.2Ω. Quando questo valore di resistenza scende al di sotto di circa 100Ω, si osserva una maggiore instabilità degli elettrodi e le letture possono variare. Abbiamo riscontrato che la «pulizia» e il precondizionamento degli elettrodi sono essenziali per ottenere letture stabili.)

Come pulisco il mio elettrodo?

La pulizia degli elettrodi consiste nell’uso periodico di un detergente enzimatico (Enzol, Tergazyme) e/o nell’ammollo in candeggina domestica non profumata (NaClO al 3%). La candeggina serve a ricoprire nuovamente le superfici di Ag con AgCl e a sciogliere le proteine accumulate. Entrambi questi effetti causano instabilità degli elettrodi. Il detergente enzimatico è un agente sicuro per rimuovere dai componenti del mezzo di coltura, come il DMEM, i residui depositati sugli elettrodi. Se si lascia che questi si accumulino, la lettura della resistenza aumenta e può anche diventare instabile.

E il precondizionamento degli elettrodi?

Il precondizionamento degli elettrodi consiste nel lasciarli immersi nel mezzo di misura per un certo periodo, così da permettere a eventuali liquidi estranei di fuoriuscire dai pellet permeabili. Per sterilizzare questi elettrodi si usa spesso l’alcol, che viene assorbito e oppone un’elevata resistenza al flusso elettrico. Man mano che l’alcol viene lentamente sostituito dal mezzo a base salina all’interno dell’elettrodo, i valori di resistenza rilevati tendono a diminuire.

Puoi fornirmi un semplice sistema di acquisizione dati per TEER?

Il Lab-Trax-4 è un registratore di dati analogico-digitale silenzioso a 12 bit e quattro canali, con velocità di campionamento fino a 10.000 campioni al secondo, ovvero 2500 s/S per tutti e quattro i canali. L'unità è alimentata direttamente dalla porta USB2 e può essere usata sul campo con un laptop come dispositivo portatile. L'hardware dispone, se necessario, di quattro ingressi digitali e quattro uscite digitali. Il software LabScribe3 è facile da usare e viene aggiornato frequentemente per soddisfare le esigenze più attuali. Man mano che Microsoft continua ad aggiornare i sistemi operativi, l'hardware continuerà a essere supportato dalle versioni più recenti di LabScribe. Ora è supportato anche sui computer basati su Mac e Linux. Se usi un STX2 per effettuare queste misurazioni, potresti aver bisogno di un paio di mani in più per inserire il testo. Se inserisci il testo nel campo Marks prima di effettuare le misurazioni, dovrai solo premere il tasto Invio per inserire il contrassegno quando la lettura TEER si è stabilizzata. Se usi un STX100, avrai le mani libere per prendere appunti.

Quali difficoltà potrei incontrare nella misurazione del TEER?

Questo testo è stato scritto per affrontare i problemi relativi a STX2, ma si applica anche a EndOhm. Ognuno dei seguenti fattori può modificare la lettura della resistenza: • Distanza tra gli elettrodi. Non allargare né comprimere la distanza tra gli elettrodi STX2. • Resistenza degli elettrodi. Mantieni gli elettrodi puliti e condizionati. • Profondità degli elettrodi. Immergi sempre gli elettrodi ad almeno 2 mm di profondità. • Elettrodi vicini alle pareti di plastica. Se possibile, cerca di tenere gli elettrodi lontani dalle pareti della piastra. • Posizionamento degli elettrodi. Se di solito appoggi sulla piastra inferiore il braccio più lungo dell'elettrodo, ripeti questa disposizione per garantire la coerenza delle misurazioni. • Resistenza del fluido. Non lasciare evaporare il terreno di coltura e non diluirlo. • Livello del fluido. Cerca di mantenere lo stesso volume di fluido per ogni lettura. Una piccola variazione può avere un effetto significativo in un inserto piccolo. Movimento eccessivo. Cerca di tenere fermi gli elettrodi. In alcuni casi, è possibile utilizzare un supporto meccanico per gli elettrodi. • Il lavaggio o il cambio del terreno di coltura può causare una rottura della membrana dell'inserto per colture cellulari. Il cambio del fluido va eseguito con cautela, lungo la parete degli inserti. Un piccolo spazio in cui il tessuto o lo strato cellulare si è sollevato dalla membrana dell'inserto per colture cellulari può creare un percorso diretto che consente all'EVOM2 di rilevare una resistenza più bassa. La corrente attraversa questo spazio invece della membrana che contiene il monostrato cellulare, poiché l'elettricità tende a seguire il percorso di minore resistenza. In questi casi, si noterà un drastico calo della resistenza. Quando si osserva una diminuzione così marcata del valore della resistenza, consigliamo di esaminare il campione (ad es. il monostrato cellulare su un inserto per colture cellulari) al microscopio, per verificare se il filtro è lesionato o presenta un'ampia area vuota, segno che un gruppo di cellule si è staccato. Acquisire più letture nello stesso pozzetto (3-5 volte) e calcolarne la media può aiutare a ridurre la variabilità.

Puoi suggerire alcuni parametri sperimentali che si possono controllare per ottenere risultati TEER costanti?

• È noto che la temperatura influisce sui valori TEER. Per ottenere valori coerenti, consigliamo di mantenere una temperatura costante. Poiché le misurazioni vengono effettuate nel terreno di coltura cellulare/tampone, consigliamo di utilizzare un bagno termostatico a temperatura fissa per riscaldare il terreno/tampone da usare durante l’esperimento. Mantenere costante la temperatura del terreno/tampone garantisce condizioni sperimentali uniformi. Prima di effettuare le misurazioni, consigliamo di estrarre dall’incubatore per almeno 20 minuti la piastra con pozzetti, contenente le cellule cresciute sugli inserti di coltura, per stabilizzarla a temperatura ambiente. • Se si utilizza una camera EndOhm, assicurarsi di mantenere la stessa distanza fissa tra gli elettrodi superiore e inferiore per ottenere letture coerenti. Se si utilizza un elettrodo a bacchetta (STX2), cercare di mantenerlo in posizione verticale durante le misurazioni. Mantenere costante la posizione dell’elettrodo a bacchetta durante l’esperimento dovrebbe consentire di ottenere letture coerenti. • Consigliamo di utilizzare lo stesso fluido, con la stessa concentrazione ionica, sia sul lato apicale (ad esempio, sopra un inserto di coltura cellulare) sia sul lato basolaterale (ad esempio, nella parte inferiore dell’inserto di coltura cellulare, all’interno di un pozzetto di una piastra a 12 pozzetti). Durante la misurazione, se si utilizza tampone PBS 1X sul lato apicale, consigliamo di utilizzare tampone PBS 1X anche sul lato basolaterale. Consigliamo inoltre che i livelli dei fluidi (all’interno e all’esterno degli inserti di coltura cellulare) siano alla stessa altezza, per ridurre al minimo le differenze di pressione. Durante gli esperimenti, riempire prima il pozzetto/lato apicale con il fluido, per evitare che la pressione idrostatica sposti la membrana dal filtro. • L’utilizzo di volumi costanti di fluido (terreno/tampone) in tutti gli esperimenti riduce la variabilità dei dati.

Voglio misurare la TEER delle cellule epiteliali alveolari coltivate senza terreno di coltura sul lato apicale. Devo aggiungere terreno di coltura o tampone sul lato apicale per misurare la TEER di questi monostrati?

Sì. In parole semplici, gli elettrodi (ad es. EndOhm/ STX2) mantengono il collegamento elettrico tramite un fluido (terreno di coltura cellulare/tampone). L’assenza di fluido sulla parte superiore dell’inserto per colture cellulari interromperà il collegamento elettrico. Tuttavia, poiché queste cellule vengono coltivate senza terreno sul lato apicale, consigliamo di esporle al fluido apicale per il minor tempo possibile. Si può presumere con ragionevole sicurezza che circa 5 minuti di esposizione al terreno/tampone apicale non danneggino le cellule. Suggeriamo di eseguire un esperimento pilota per determinare per quanto tempo le cellule possono tollerare il fluido apicale. Come già detto, consigliamo di utilizzare lo stesso fluido con la stessa concentrazione ionica (ad esempio, tampone PBS 1X o terreno di coltura) sia sul lato apicale sia su quello basolaterale.

CARDIOFISIOLOGIA

CARDIOPHYS include un cavo di uscita?

Il sistema CARDIOPHYS non include un cavo di uscita come il CBL102 (BNC - spina MiniPhone da 3,5 mm), poiché il sistema di acquisizione dati può variare a seconda di quello di cui il cliente potrebbe già disporre. Se il cliente possiede già un sistema di acquisizione dati, possiamo offrire un cavo per collegare CARDIOPHYS al suo sistema, se disponibile. L’uscita di CARDIOPHYS è una spina MiniPhone da 3,5 mm. Se il cliente non possiede un sistema di acquisizione dati, insieme a CARDIOPHYS offriamo un LAB-TRAX-4, 505195 (modulo di analisi ECG), 2851 e il cavo CBL-102. Offriamo solo due cavi con spina MiniPhone da 3,5 mm: CBL100, con spina MiniPhone da 3,5 mm a spina MiniPhone da 3,5 mm, e CBL102, con spina MiniPhone da 3,5 mm a BNC (maschio).

dPatch

Come si confronta dPatch® con gli altri amplificatori sul mercato?

Il dPatch utilizza un’architettura digitale all’avanguardia. Convertendo il segnale da analogico a digitale vicino allo stadio di testa, ne preserviamo il più possibile l’integrità. Quasi tutte le specifiche relative al rumore del dPatch superano quelle di tutti gli altri amplificatori sul mercato. Inoltre, il dPatch costituisce un sistema completo per il patch clamp: sono inclusi tutto l’hardware e il software per l’acquisizione dei dati e non è necessario alcun hardware esterno per il dynamic clamp. (consulta la nostra scheda comparativa)

Perché il dPatch non ha il raffreddamento attivo?

Il raffreddamento attivo causa numerosi problemi che, a lungo andare, generano ancora più «rumore». Il calore prodotto dalle celle Peltier provoca derive termiche nei micromanipolatori, rendendo quasi impossibile mantenere la stabilità durante le registrazioni monocanale. In quanto azienda produttrice di micromanipolatori, siamo molto attenti alle prestazioni del sistema all’interno di un apparato completo per elettrofisiologia. Il raffreddamento attivo può migliorare leggermente i valori di rumore dichiarati sulla carta, ma nel mondo reale gli svantaggi superano di gran lunga il modesto guadagno in termini di prestazioni dichiarate (vedere la scheda comparativa). Inoltre, la durata limitata degli elementi Peltier comporta problemi di affidabilità che abbiamo ritenuto inaccettabili.

Devo acquistare un digitalizzatore o un software insieme al dPatch?

No, poiché dPatch è intrinsecamente un sistema digitale, non è necessario alcun digitizzatore aggiuntivo. Il software SutterPatch® e una licenza di IgorPro sono inclusi in ogni sistema dPatch. dPatch include tutto ciò che serve per iniziare a eseguire esperimenti.

Posso aggiungere in un secondo momento un secondo headstage al mio sistema dPatch con un solo headstage?

Sì, le unità headstage/preamplificatore dPatch sono intercambiabili e autonome. Tutte le informazioni di calibrazione e regolazione sono memorizzate direttamente nell’unità headstage/preamplificatore e vengono lette all’avvio. Questo rende facile aggiungere un secondo headstage.

Gli headstage sono compatibili con il mio micromanipolatore esistente?

Tutti i preamplificatori Sutter Instrument sono dotati di un raccordo a coda di rondine standard. Questo raccordo è stato introdotto congiuntamente da Sutter Instrument e Axon Instruments quasi 30 anni fa ed è stato adottato da allora dalla maggior parte dei produttori di amplificatori per patch clamp e micromanipolatori. Ciò rende i preamplificatori Sutter sostituti immediati su un sistema esistente, nella maggior parte dei casi senza richiedere alcuna regolazione.

Manuale EVOM™

Il manuale EVOM™ è compatibile con gli Endohm?

Sì, ma è necessario l’adattatore 99672 oppure il nuovo cavo EVOM3/EVOM Manual 99916.

Perché dovrei usare la funzione di cancellazione?

La funzione di azzeramento si usa per sottrarre qualsiasi misura che non provenga dalla membrana, come la resistenza degli elettrodi e del fluido.

Il sistema manuale EVOM™ calcola automaticamente la TEER?

No, la misurazione TEER richiede un calcolo dell'area. Per calcolare la TEER, moltiplicare la resistenza misurata per la superficie appropriata (riportata di seguito). Ad esempio, un inserto da 12 mm misura 565 Ω: la TEER è pari a 565 Ω × 1.13 cm2 = 638.5 Ω- cm2. Ecco le superfici generalmente applicabili ai diversi formati di piastre transwell/inserto: piastra a 6 pozzetti (inserti da 24 mm) 4.52 cm2, piastra a 12 pozzetti (inserti da 12 mm) 1.13 cm2, piastra a 24 pozzetti (inserti da 6.5 mm) 0.33 cm2, piastra a 96 pozzetti (inserti da 4.3 mm) 0.14 cm2. Per le misurazioni TEER automatizzate, si consiglia di utilizzare il sistema automatizzato di misurazione TEER REMS di WPI.

I dati di EVOM™ Manual vengono salvati automaticamente quando si raggiunge l’ultimo pozzetto. Come posso salvare i dati se voglio misurare solo 8 dei 96 pozzetti?

Cancella tutti i dati in memoria aprendo le impostazioni, quindi il menu di archiviazione, e premendo «Nuova piastra»: in questo modo verranno cancellate tutte le misurazioni precedenti. Torna alla schermata principale, apri la schermata di anteprima, seleziona ciascun pozzetto da misurare (la selezione diventerà verde), posiziona l’elettrodo e avvia la misurazione. Dopo aver misurato i pozzetti selezionati, apri le impostazioni, premi il menu della schermata di archiviazione e poi «Salva nuovo» per salvare i dati della piastra sull’unità USB.

Come dovresti conservare il manuale EVOM™ e gli elettrodi se saranno esposti alla luce UV in una cappa a flusso laminare per periodi prolungati?

Dopo l’uso, estrarre EVOM™ Manual dalla cappa a flusso laminare. La volta successiva, accendere la lampada UV all’interno della cappa. Una volta disinfettata la cappa con i raggi UV, spegnere la lampada UV; quindi spruzzare etanolo o isopropanolo al 70-100% su un tovagliolo di carta e pulire EVOM™ Manual. Non spruzzare l’alcol direttamente su EVOM™ Manual.

Perché su EVOM™ Manual visualizzo dei trattini, anche se l’elettrodo STX4 è immerso nel campione?

L’elettrodo esposto all’aria o immerso solo parzialmente nel liquido può mostrare trattini, poiché registra letture instabili. La punta dell’elettrodo (area di rilevamento) deve rimanere completamente immersa. Potresti notare letture instabili anche quando la punta dell’elettrodo non è completamente immersa. Assicurati di scegliere volumi apicali e basolaterali tali da mantenere la punta dell’elettrodo completamente immersa. È necessario utilizzare volumi apicali e basolaterali superiori a quelli suggeriti dal produttore dell’inserto. Ad esempio, per un Transwell Corning a 24 pozzetti (ad esempio Corning 3470), consigliamo almeno 300 µL nella parte superiore (apicale) e 850 µL nella parte inferiore (basolaterale). [Questi volumi sono leggermente superiori al minimo richiesto per l’elettrodo STX4.] Ecco i passaggi: 1. Regolazione dell’altezza dell’elettrodo STX4. Ruota l’anello anteriore in senso orario affinché l’elettrodo possa entrare nel pozzetto fino alla massima profondità. 2. Requisiti relativi alla punta dell’elettrodo STX4 e al volume di liquido. Assicurati che le punte di rilevamento dell’elettrodo (le parti racchiuse nei riquadri rossi) su entrambe le lame rimangano completamente immerse in un liquido conduttivo, come un terreno di coltura cellulare o un tampone, durante la misurazione. Per ottenere una lettura stabile, è necessario disporre di volumi apicali e basolaterali adeguati. Poiché l’STX4 resta sospeso, è necessario usare un volume maggiore per assicurarsi che l’area di rilevamento dell’elettrodo sia completamente immersa. NOTA: È necessario utilizzare volumi di liquido superiori a quelli raccomandati dal produttore dell’inserto. I volumi raccomandati dal produttore dell’inserto non manterranno la punta dell’elettrodo completamente immersa. [Come indicato nell’esempio precedente, per un Transwell Corning a 24 pozzetti (ad esempio Corning 3470), consigliamo di usare almeno 300 µL nella parte superiore (apicale) e 850 µL nella parte inferiore (basolaterale). Questi volumi sono leggermente superiori al minimo richiesto per l’elettrodo STX4. Puoi controllare visivamente che i volumi apicale e basolaterale siano sufficienti a mantenere le punte degli elettrodi completamente immerse, quindi usare sempre gli stessi volumi.]

Aumentare o modificare i volumi dei liquidi campione può cambiare i miei valori di resistenza?

Puoi aspettarti di osservare una variazione dei valori grezzi di resistenza. Tuttavia, sottrai i valori del bianco (Transwell vuoto, senza cellule) dai valori dei campioni (Transwell con cellule). In questo modo, sottrai il valore del bianco con volume aumentato da quello dei campioni con volume aumentato. Pertanto, qualsiasi variazione della resistenza dovuta all’aumento del volume viene esclusa. Usa sempre gli stessi volumi per tutti i campioni di un esperimento.

C'è un'istruzione per la pulizia o la manutenzione degli elettrodi che posso seguire?

Di seguito sono riportati i passaggi da seguire per la pulizia o la manutenzione di STX4. Durante la pulizia o la manutenzione, assicurarsi che il livello del liquido sia sufficiente e raggiunga almeno la zona delimitata in rosso. 1. Sciacquare con acqua DI sterile o soluzione tampone. 2. Passaggio facoltativo: immergere rapidamente in etanolo o isopropanolo al 70% e poi in acqua DI o soluzione tampone. 3. Utilizzare l’elettrodo per le misurazioni. 4. Passaggio facoltativo tra la misurazione di un campione e l’altra: immergere rapidamente in etanolo o isopropanolo al 70% e poi in acqua DI o soluzione tampone. 5. Dopo le misurazioni, immergere le punte dell’elettrodo in isopropanolo o etanolo al 70% per 5-10 minuti. 6. Sciacquare con acqua DI. Lasciare asciugare all’aria. Conservare l’elettrodo asciutto e al riparo dalla luce o esposto a una luce minima. 7. In caso di uso frequente, immergere le punte dell’elettrodo ogni settimana in Tergazyme all’1% per 15 minuti. Sciacquare poi con acqua DI. 8. Utilizzare per le misurazioni.

Perché le mie misurazioni sembrano variare*?

*Deriva–Letture che aumentano o diminuiscono significativamente e in modo continuo nel tempo (sia la tensione che la resistenza). Esempio: a 1000 Ω, la lettura aumenta di 100 Ω/minuto. (Una deriva di 10 Ω/minuto è accettabile.) Una deriva eccessiva può essere causata da variazioni del pH o della temperatura, oppure dalla necessità di pulire l’elettrodo. Ci sono diverse possibili cause di questa deriva. Assicurarsi che gli elettrodi siano completamente immersi nella soluzione del terreno di coltura e che la temperatura del liquido nella piastra sia uniforme, lasciando la piastra a temperatura ambiente fino all’equilibrio oppure utilizzando un riscaldatore per piastre. -Un’altra causa comune di deriva è l’accumulo di residui dei componenti del terreno di coltura cellulare sulle punte degli elettrodi: le punte degli elettrodi richiedono una pulizia enzimatica (Tergazyme o Enzol) periodica, fino a una volta alla settimana, a seconda dell’uso. Durante una misurazione, anche gli elettrodi portatili devono essere mantenuti il più possibile immobili. Movimenti eccessivi causano oscillazioni della misurazione. Inoltre, in un ambiente al 5% di CO2, la perdita di CO2 provoca una variazione del pH del terreno di coltura e può modificare la lettura della resistenza. Ciò è rilevante soprattutto quando si effettuano misurazioni continue per periodi prolungati (ore, anziché pochi minuti).

Perché le letture dei miei elettrodi sono instabili*?

*Instabilità - A 500 Ω, la lettura oscilla tra 450 e 550 Ω e non si stabilizza (nell’intervallo di 500 Ω è accettabile un’instabilità di ±5 Ω). Negli intervalli superiori, fino a ±1000 Ω nell’intervallo di 100K è accettabile. Gli elettrodi che mostrano instabilità potrebbero richiedere una pulizia enzimatica. Le cause più comuni dell’instabilità delle letture possono essere risolte immergendo completamente le punte nella soluzione o eseguendo una pulizia enzimatica. Le punte degli elettrodi non sono completamente immerse in una quantità adeguata di liquido conduttivo (terreno di coltura o tampone). Aggiungere altro liquido per portarne il livello fino alle punte degli elettrodi. (Usare volumi apicali e basolaterali costanti per ottenere confronti coerenti.) Le punte degli elettrodi (area di rilevamento) potrebbero presentare depositi di componenti del terreno di coltura cellulare; il problema può essere risolto con una pulizia enzimatica.

Come faccio a verificare che il mio sistema manuale EVOMTM funzioni correttamente?

Utilizzare il resistore di prova da 1000 ohm per testare e calibrare il misuratore EVOM stesso. Verificare che il display mostri una lettura di 1000 ohm +/- 1 ohm. Per maggiori dettagli sulla calibrazione, consultare il manuale utente. Una versione PDF del manuale è disponibile nella scheda «support» del nostro sito web, alla voce «manuals». Per testare il funzionamento dell’elettrodo, si esegue un test di resistenza con KCl. Preparare soluzioni di KCl con concentrazioni di 40, 80 e 160 mM usando acqua deionizzata (DI). Quando la concentrazione della soluzione di KCl raddoppia, la lettura della resistenza dovrebbe diminuire di circa la metà. Se si verificano valori di resistenza instabili con soluzioni di KCl da 80 e 160 mM, verificare che: La punta dell’elettrodo o la zona di rilevamento sia completamente immersa nel liquido conduttivo (terreno o tampone) durante la misurazione. L’elettrodo deve essere pulito. Si raccomanda vivamente di pulire e sottoporre a manutenzione regolarmente l’elettrodo, operazioni necessarie per garantirne la durata funzionale.

ENDOM

Risoluzione dei problemi relativi alle letture instabili della resistenza di un ENDOHM

Una delle domande frequenti (FAQ) riguarda le misurazioni TEER con un EndOhm. Se le letture della resistenza del vostro ENDOHM non si stabilizzano, potrebbe essere necessario effettuare alcune verifiche. Verificare l’EVOM2: Per prima cosa, verificate il misuratore EVOM2. A questo scopo è possibile usare la resistenza di prova da 1000Ω (WPI # 91750). Inserite il connettore RJ-11 all’estremità della resistenza di prova nella porta Input del misuratore. Impostate il selettore di funzione su Ohms. Scollegate l’EVOM2 dal caricabatterie e accendetelo (I). Il misuratore dovrebbe indicare 1000Ω. In caso contrario, regolate la vite R ADJ con un piccolo cacciavite a taglio finché il misuratore non indica 1000Ω. Se l’EVOM2 indica 1000 ± 2-3 ohm e la lettura rimane stabile, l’EVOM2 funziona correttamente. Verificare l’ENDOHM: Successivamente, verificate l’ENDOHM. Potete comunque verificarlo qualitativamente esponendolo a diverse concentrazioni di KCl. Le letture dovrebbero essere sempre stabili e mostrare un valore TEER più basso alle concentrazioni più elevate e un valore più alto, ma potenzialmente meno stabile, alle concentrazioni più basse. In generale, se la lettura TEER diminuisce, significa che la corrente sta trovando un percorso alternativo con una resistenza inferiore rispetto al solo mezzo di coltura, oppure che il preparato sta in qualche modo acquisendo una carica. Se il problema è effettivamente nell’ENDOHM, in genere è causato da una perdita di mezzo di coltura sotto le superfici degli elettrodi, dove può danneggiare i collegamenti dei fili ai dischi di Ag/AgCl. Una reazione ritardata può dipendere dal tempo necessario al mezzo per penetrare in fessure molto sottili in cui il legame adesivo ha perso la tenuta. Se la lettura TEER continua a diminuire ben al di sotto del valore previsto, è probabile che l’ENDOHM abbia una perdita in corrispondenza del fissaggio dell’elettrodo o che vi sia corrosione in qualche punto dei percorsi della corrente o della tensione. Se nell’ENDOHM si sono formate fessure sottili, è necessario sostituirlo.

EVOM3

L’EVOM3 è compatibile con gli Endohm?

Sì, ma è necessario l'adattatore 99672 oppure il nuovo cavo EVOM3 99916.

Perché dovrei usare la funzione di cancellazione?

La funzione di azzeramento si usa per sottrarre qualsiasi misura che non provenga dalla membrana, come la resistenza degli elettrodi e del fluido.

Il sistema EVOM3 calcola automaticamente la TEER?

No, la misurazione del TEER richiede il calcolo dell’area. Per calcolare il TEER, moltiplica la resistenza misurata per l’area superficiale appropriata (riportata di seguito). Ad esempio, se un inserto da 12 mm misura 565 Ω, il TEER è 565 Ω × 1.13 cm2 = 638.5 Ω- cm2. Ecco le aree superficiali generalmente applicabili ai diversi formati di piastre transwell/inserto: piastra a 6 pozzetti (inserti da 24 mm) 4.52 cm2, piastra a 12 pozzetti (inserti da 12 mm) 1.13 cm2, piastra a 24 pozzetti (inserti da 6.5 mm) 0.33 cm2, piastra a 96 pozzetti (inserti da 4.3 mm) 0.14 cm2

I dati EVOM3 vengono memorizzati automaticamente quando si raggiunge l’ultimo pozzetto. Come posso memorizzare i dati se voglio misurare solo 8 pozzetti su 96?

Cancella tutti i dati in memoria aprendo le impostazioni, quindi il menu di archiviazione, e premendo «Nuova piastra»: in questo modo verranno cancellate tutte le misurazioni precedenti. Torna alla schermata principale, apri la schermata di anteprima, seleziona ciascun pozzetto da misurare (la selezione diventerà verde), posiziona l’elettrodo e avvia la misurazione. Dopo aver misurato i pozzetti selezionati, apri le impostazioni, premi il menu della schermata di archiviazione e poi «Salva nuovo» per salvare i dati della piastra sull’unità USB.

Come dovresti conservare EVOM3 ed elettrodi se saranno esposti alla luce UV in una cappa a flusso laminare per periodi prolungati?

Dopo l'uso, estrarre EVOM3 dalla cappa a flusso laminare. La volta successiva, accendere la lampada UV all'interno della cappa. Dopo aver disinfettato la cappa con i raggi UV, spegnere la lampada UV, quindi spruzzare etanolo o isopropanolo al 70-100% su un tovagliolo di carta e pulire EVOM3. Non spruzzare l'alcol direttamente su EVOM3.

Perché EVOM3 mi dà dei trattini come lettura, anche se l’elettrodo STX2-PLUS è immerso nel campione?

L’elettrodo esposto all’aria o immerso solo parzialmente nel liquido può mostrare trattini, poiché rileva letture instabili. La punta dell’elettrodo (zona di rilevamento) deve rimanere completamente immersa. Potresti notare letture instabili anche quando la punta dell’elettrodo non è completamente immersa. Assicurati di scegliere volumi apicali e basolaterali tali da mantenere la punta dell’elettrodo completamente immersa. È necessario usare volumi apicali e basolaterali superiori a quelli suggeriti dal produttore dell’inserto. Ad esempio, per una piastra Transwell Corning a 24 pozzetti (ad esempio Corning 3470), consigliamo almeno 300 µL nella parte superiore (apicale) e 850 µL nella parte inferiore (basolaterale). [Questi volumi sono leggermente superiori al minimo necessario per l’elettrodo STX2-PLUS.] Ecco i passaggi: 1: Regolazione dell’altezza dell’elettrodo STX2-PLUS. Ruota l’anello anteriore in senso orario affinché l’elettrodo possa raggiungere la massima profondità all’interno del pozzetto. 2: Requisiti relativi alla punta dell’elettrodo STX2-PLUS e al volume del liquido. Assicurati che le punte di rilevamento dell’elettrodo (le parti riquadrate in rosso) su entrambe le lame rimangano completamente immerse in un liquido conduttivo, come un terreno di coltura cellulare o un tampone, durante la misurazione. Per ottenere una lettura stabile, i volumi apicali e basolaterali devono essere adeguati. Poiché l’STX2-PLUS rimane sospeso, è necessario usare un volume maggiore per assicurarsi che la zona di rilevamento dell’elettrodo sia completamente immersa. NOTA: È necessario usare volumi di liquido superiori a quelli consigliati dal produttore dell’inserto. I volumi consigliati dal produttore dell’inserto non manterranno la punta dell’elettrodo completamente immersa. [Come già indicato nell’esempio precedente, per una piastra Transwell Corning a 24 pozzetti (ad esempio Corning 3470), consigliamo almeno 300 µL nella parte superiore (apicale) e 850 µL nella parte inferiore (basolaterale). Questi volumi sono leggermente superiori al minimo necessario per l’elettrodo STX2-PLUS. Puoi verificare visivamente che i volumi apicali e basolaterali siano sufficienti a mantenere le punte degli elettrodi completamente immerse e poi usare sempre gli stessi volumi.] Anche se il problema delle letture instabili o dei trattini persiste, molto probabilmente è necessario clorurare l’elettrodo. La clorurazione consiste nel mantenere le punte dell’elettrodo immerse in ipoclorito di sodio al 3-6% o candeggina per 10-15 minuti, quindi risciacquarle con acqua distillata. È una parte della manutenzione dell’STX2-PLUS e un’operazione fondamentale. Consulta le istruzioni di manutenzione riportate di seguito (passaggio 1). ** Di seguito sono riportati i passaggi per la pulizia o la manutenzione dell’STX2-PLUS. 1. Prima dell’uso, clorura gli elettrodi mantenendone le punte immerse in ipoclorito di sodio (candeggina) al 3-6% per 10-15 minuti. Se gli elettrodi vengono usati frequentemente, la clorurazione va eseguita ogni 3 giorni oppure dopo più di una settimana di conservazione. ** 2. Risciacqua con acqua DI sterile/tampone. 3. Passaggio facoltativo: immergi rapidamente in etanolo o isopropanolo al 70%, quindi immergi rapidamente in acqua DI/tampone. 4. Usa l’elettrodo per le misurazioni. 5. Passaggio facoltativo tra la misurazione dei campioni: immergi rapidamente in etanolo o isopropanolo al 70%, quindi immergi rapidamente in acqua DI/tampone. 6. Dopo le misurazioni, immergi le punte dell’elettrodo in isopropanolo o etanolo al 70% per 5-10 minuti. 7. Risciacqua con acqua DI. Lascia asciugare all’aria. Conserva l’elettrodo asciutto, in un luogo al riparo dalla luce o con poca luce. 8. In caso di uso frequente, immergi ogni settimana le punte dell’elettrodo in Tergazyme all’1% per 15 minuti. Risciacqua poi con acqua DI. 9. Quindi, clorura mantenendo le punte dell’elettrodo immerse in ipoclorito di sodio (candeggina) al 3-6% per 10-15 minuti. (Come al passaggio n. 1.) 10. Risciacqua con acqua DI sterile/tampone. 11. Usa per le misurazioni. 12. Ripeti dal passaggio 5.

Aumentare o modificare i volumi dei liquidi campione può cambiare i miei valori di resistenza?

Puoi aspettarti di osservare una variazione dei valori grezzi di resistenza. Tuttavia, sottrai i valori del bianco (Transwell vuoto, senza cellule) dai valori dei campioni (Transwell con cellule). In questo modo, sottrai il valore del bianco con volume aumentato da quello dei campioni con volume aumentato. Pertanto, qualsiasi variazione della resistenza dovuta all’aumento del volume viene esclusa. Usa sempre gli stessi volumi per tutti i campioni di un esperimento.

C'è un'istruzione per la pulizia o la manutenzione degli elettrodi che posso seguire?

Di seguito sono riportati i passaggi da seguire per la pulizia o la manutenzione di STX2-PLUS. Durante la pulizia o la manutenzione, assicurarsi di usare una quantità di liquido sufficiente a coprire almeno la zona delimitata in rosso. 1. Prima dell’uso, clorurare l’elettrodo mantenendone le punte immerse in ipoclorito di sodio (candeggina) al 3-6% per 10-15 minuti. La clorurazione va effettuata ogni 3 giorni se gli elettrodi vengono usati frequentemente oppure dopo essere stati conservati per più di una settimana. 2. Sciacquare con acqua DI sterile o tampone. 3. Passaggio facoltativo: immergere rapidamente in etanolo o isopropanolo al 70%, quindi immergere rapidamente in acqua DI o tampone. 4. Usare l’elettrodo per le misurazioni. 5. Passaggio facoltativo tra la misurazione di un campione e l’altra: immergere rapidamente in etanolo o isopropanolo al 70%, quindi immergere rapidamente in acqua DI o tampone. 6. Dopo le misurazioni, immergere le punte dell’elettrodo in isopropanolo o etanolo al 70% per 5-10 minuti. 7. Sciacquare con acqua DI. Lasciare asciugare all’aria. Conservare l’elettrodo asciutto, in un luogo al riparo dalla luce o con illuminazione minima. 8. In caso di uso frequente, immergere le punte dell’elettrodo in Tergazyme all’1% per 15 minuti ogni settimana. Quindi sciacquare con acqua DI. 9. Quindi, clorurare l’elettrodo mantenendone le punte immerse in ipoclorito di sodio (candeggina) al 3-6% per 10-15 minuti. (Come al passaggio #1.) 10. Sciacquare con acqua DI sterile o tampone. 11. Usare per le misurazioni. 12. Ripetere dal passaggio 5.

Ci sono altre istruzioni per la manipolazione degli elettrodi consigliate da WPI?

1. NON tenere l’elettrodo per il cavo. Le connessioni interne potrebbero danneggiarsi gradualmente. 2. Tieni l’elettrodo nella zona indicata dalla freccia (in plastica). 3. Limita l’immersione o gli spruzzi di liquido al livello indicato (massimo). Il liquido non deve penetrare all’interno e raggiungere i cavi o i connettori interni. Puoi pulire il resto dell’elettrodo con un tovagliolo di carta imbevuto di isopropanolo o etanolo (non spruzzare direttamente).

KWIK-SIL/KWIK-CAST

Voglio usare la colla chirurgica KwikSil nei miei esperimenti di «imaging» sui ratti. Come posso eliminare completamente le bolle o, almeno, ridurle il più possibile?

Le bolle sono idrogeno gassoso, rilasciato come sottoprodotto del processo di polimerizzazione. La polimerizzazione avviene in un tempo così breve che il gas non riesce a fuoriuscire. Un tempo di polimerizzazione più lungo potrebbe aiutare. Per rallentare il processo di polimerizzazione, raffredda il materiale prima di mescolarlo.

È possibile rimuovere in sicurezza l’adesivo dal pelo dei roditori dopo che si è indurito?

Se Kwik-Cast/Sil viene applicato al pelo dei roditori, l’adesivo indurito può essere rimosso. Basta tirare via delicatamente e lentamente l’adesivo indurito dal pelo. Naturalmente, il pelo e i capelli contengono oli.

Microelettrodi metallici

Di che lunghezza ho bisogno?

La lunghezza complessiva di qualsiasi sistema di elettrodi dipende principalmente dalla profondità del tessuto che si desidera registrare o stimolare e dal sistema di microazionamento utilizzato. Le microsonde di tungsteno sono disponibili in lunghezze di 76 mm o 125 mm (non trovo la versione da 125 um sul sito web di WPI) oppure possono essere ordinate su misura in qualsiasi lunghezza inferiore a 5 pollici. Gli elettrodi di platino/iridio sono generalmente lunghi due pollici e quelli di acciaio inossidabile 51 mm, ma entrambi possono essere richiesti anche in lunghezze inferiori o, nel caso dell’acciaio inossidabile, in lunghezze maggiori usando tubi in poliimmide. A causa dell’elevato costo dell’iridio puro, viene sempre montato in tubi di acciaio inossidabile e poliimmide e ha in genere una lunghezza di 50 mm.

Qual è lo spessore dell'isolamento?

Tutti gli elettrodi, tranne la microsonda in tungsteno con profilo Extra Fine-F da 3 pollici, dotata di un rivestimento isolante in Parylene-C di 1 micron, hanno uno strato di Parylene-C di 3 micron. È stato dimostrato che questo spessore è il più adatto per quasi tutti i profili delle punte degli elettrodi che offriamo. Abbiamo scelto 3 micron per ottenere un profilo della punta sufficientemente piccolo da consentire di avvicinarsi agli elementi neurali, facilitare l’inserimento dell’elettrodo e ridurre al minimo l’attenuazione negli elettrodi a impedenza più elevata. Quando si registra in strutture profonde con microsonde a impedenza più elevata, può verificarsi un’attenuazione del segnale dovuta a una derivazione capacitiva; potrebbe quindi essere necessario un ulteriore isolamento, come quello delle microsonde in poliimmide KT di WPI. Il profilo Extra Fine (ad es. TM31C10) degli elettrodi in tungsteno da 3 pollici offre una punta della microsonda estremamente fine, ideale per registrare da strutture cellulari piccole e densamente raggruppate.

Quale impedenza o esposizione della punta mi serve?

Grazie al nostro esclusivo processo di fabbricazione e alle proprietà speciali del Parylene-C, possiamo esporre qualsiasi microsonda con precisione microscopica e riproducibilità. Ogni microsonda viene esposta singolarmente al microscopio ad alto ingrandimento, ispezionata e caratterizzata elettricamente. Le nostre microsonde hanno un valore di impedenza inferiore rispetto ad altri elettrodi disponibili in commercio, a parità di esposizione della punta. Consigliamo quindi a chi non ha mai utilizzato i nostri elettrodi di indicare un intervallo di impedenza, così da poter selezionare il valore più adatto alla propria applicazione. Inoltre, poiché forniamo microsonde ai ricercatori da oltre 30 anni, possiamo offrire consulenza specializzata nella scelta del design dell’elettrodo più adatto al vostro paradigma sperimentale. Vi invitiamo a contattarci e a fornirci informazioni sui requisiti del vostro ricercatore. Non è previsto alcun costo aggiuntivo per specificare un intervallo di valori di impedenza per qualsiasi confezione di microsonde.

Qual è il profilo della punta più adatto alla mia applicazione?

Offriamo una varietà di profili alternativi della punta per chi preferisce un elettrodo con una geometria specifica per la propria ricerca. La scelta della punta può apportare modifiche sottili ma importanti alle prestazioni dell’elettrodo, come descritto di seguito. Si consiglia a chi utilizza questi elettrodi per la prima volta di provare diversi profili della punta, per stabilire quale sia più adatto ai propri protocolli di registrazione o stimolazione. A-Standard Il nostro profilo standard presenta una punta affilata ma robusta, che offre prestazioni versatili e un efficace equilibrio tra capacità di penetrazione e durata. È il profilo più utilizzato e lo consigliamo per la maggior parte delle applicazioni di registrazione neurale, anche se è efficace anche per la maggior parte dei protocolli di stimolazione. Utilizziamo un metodo di esposizione ad arco che garantisce prestazioni precise e costanti, oltre a un’ampia gamma di impedenze disponibili. Sebbene questo metodo comporti una lieve variabilità dell’impedenza da un elettrodo all’altro, la maggior parte dei ricercatori la ritiene del tutto accettabile per la propria applicazione. Per chi necessita di un’esposizione della punta più precisa, offriamo un servizio di esposizione laser con un piccolo sovrapprezzo. Contattateci se ritenete che questo servizio faccia al caso vostro. B-Blunted I nostri elettrodi a punta smussata sono progettati con una punta più arrotondata, a forma di proiettile. Per molte applicazioni, la punta smussata può offrire prestazioni di stimolazione superiori: il profilo più corto può far sì che l’elettrodo agisca maggiormente come una sorgente puntiforme e garantisca un migliore isolamento. Molti ricercatori ritengono che questo profilo offra una maggiore selettività rispetto ai profili convenzionali con punta più affilata e sia più adatto ai protocolli di stimolazione ad alta intensità. Alcuni ricercatori hanno inoltre osservato che l’uso di punte smussate comporta meno casi di perforazione delle cellule. F-Extra fine Il nostro profilo a punta extrafine presenta una rastremazione decisamente più accentuata e uno strato isolante più sottile. Questo tipo di elettrodo è comunemente usato nelle preparazioni superficiali, quando è necessario registrare l’attività di popolazioni cellulari piccole e densamente impacchettate, come gli strati striati delle cortecce visiva e uditiva. Data la natura estremamente delicata di queste punte, sono disponibili esclusivamente su elettrodi in tungsteno, con lunghezza di 3 pollici (76mm) e diametro del gambo di 0.003" e 0.005" (75 e 125 micron). Per penetrazioni superiori a 4 mm con un’impedenza della punta maggiore di 1.5 MΩ, consigliamo di specificare uno strato aggiuntivo di tubo in poliimmide, per ridurre la derivazione capacitiva e aumentare la rigidità dell’elettrodo. H-Heat Treated I nostri elettrodi trattati termicamente sono destinati ai ricercatori che devono far penetrare le sonde attraverso membrane resistenti, come la dura madre dei mammiferi di taglia maggiore. Applicando una fonte di calore vicino alla punta dell’elettrodo, sotto un microscopio, possiamo ottenere un elettrodo con una punta a rastremazione più graduale rispetto al nostro profilo standard, irrobustendo al contempo l’isolamento polimerico in prossimità della punta. Queste modifiche consentono di spingere più facilmente l’elettrodo attraverso membrane resistenti, riducendo il rischio di danneggiare la punta e l’isolamento.

Problemi a leggere l’impedenza dei tuoi microelettrodi metallici?

1. Controlla il tuo misuratore di impedenza: potresti misurare i valori di impedenza a una frequenza diversa da 1 kilohertz. 2. Verifica se il tuo misuratore di impedenza è privo di un circuito di campionamento e mantenimento: in tal caso, l’impedenza viene misurata immediatamente quando premi il pulsante di test e non ha il tempo di stabilizzarsi. 3. Di solito, l’impedenza diminuisce dopo che l’elettrodo è rimasto per qualche minuto nella soluzione salina. 4. A volte gli elettrodi possono ossidarsi, aumentando l’impedenza. In tal caso, consigliamo di applicare all’elettrodo, immerso nella soluzione salina, una tensione negativa di circa 3-4,5 volt per pulirlo e rimuovere l’ossido.

Quale configurazione degli elettrodi mi serve?

Al momento offriamo tre diverse configurazioni di elettrodi, anche se in passato abbiamo realizzato molti modelli personalizzati per i clienti. Osservando i codici prodotto delle nostre sonde, visibili nella sezione Prodotti, noterete che hanno un codice come WE30031.0A5. La parte 00 del codice specifica la configurazione della microsonda. Elettrodi monopolari - 00 Indica che non è previsto un montaggio speciale: la sonda affilata è isolata con Parylene-C e presenta lunghezza, larghezza, profilo della punta e impedenza specificati nelle tabelle per ordinare gli elettrodi. Tubi in poliimmide - PT Elettrodi montati in tubi di poliimmide per aumentarne la rigidità e fornire uno spessore isolante aggiuntivo. Questo tipo di montaggio è generalmente consigliato quando elettrodi con impedenza relativamente elevata devono penetrare negli strati più profondi del cervello o del midollo spinale. ST Specifica i nostri elettrodi bipolari o stereotrodi. Se ordinati con impedenze inferiori a 0,5 megaohm, questi elettrodi sono eccellenti per localizzare i campi di corrente di stimolazione. Gli stereotrodi con impedenza più elevata sono ideali per migliorare l’isolamento di singoli elementi neurali, registrando simultaneamente più unità su due microelettrodi ravvicinati. La distanza tra le punte è generalmente pari al diametro del gambo di uno degli elettrodi utilizzati per realizzare lo stereotrodo. Su richiesta sono disponibili distanze diverse tra le punte.

Che tipo di connettori si usano con i nostri elettrodi?

I connettori a pin 5482 e 5483 sono fissati all’estremità distale dei nostri elettrodi. Puoi acquistare questi connettori e il connettore compatibile M202 facendo clic qui e visitando la nostra pagina degli accessori. Molti utenti preferiscono usare i nostri elettrodi senza connettori, e va benissimo. Se lo richiedi, li rimuoveremo per te. Non è previsto alcuno sconto, perché i connettori vengono fissati all’inizio del processo di fabbricazione.

Quali sono le esposizioni della punta per i diversi valori di impedenza degli elettrodi?

Le esposizioni della punta per i profili di punta Heat Tapered "H" sono maggiori di circa il 15-20%. Le esposizioni della punta per i profili di punta Blunted "B" sono minori di circa il 15-20%. Le esposizioni della punta per i profili di punta Extra Fine "F" sono maggiori di circa il 10-15%.

Problemi a leggere l’impedenza dei tuoi microelettrodi metallici?

1. Controlla il tuo misuratore di impedenza: potresti misurare i valori di impedenza a una frequenza diversa da 1 kilohertz. 2. Verifica se il tuo misuratore di impedenza è privo di un circuito di campionamento e mantenimento: in tal caso, l’impedenza viene misurata immediatamente quando premi il pulsante di test e non ha il tempo di stabilizzarsi. 3. Di solito, l’impedenza diminuisce dopo che l’elettrodo è rimasto per qualche minuto nella soluzione salina. 4. A volte gli elettrodi possono ossidarsi, aumentando l’impedenza. In tal caso, consigliamo di applicare all’elettrodo, immerso nella soluzione salina, una tensione negativa di circa 3-4,5 volt per pulirlo e rimuovere l’ossido.

NANOLITER2020

Qual è il vantaggio di usare micropipette di vetro riempite d’olio?

Il termine «riempimento dal retro» indica il processo di riempimento della pipetta dall’estremità ampia, non tirata. «Riempimento dalla punta» è il termine usato per descrivere il riempimento di una micropipetta attraverso l’estremità anteriore, stretta e tirata. Le micropipette di vetro vengono prima riempite completamente dal retro con olio minerale e fissate alla testina dell’iniettore NANOLITER. Si eroga quindi un po’ di olio minerale attraverso la punta. In questo modo si crea lo spazio necessario e si genera la pressione per riempire i campioni dalla punta. Riempire il campione dalla punta evita la fuoriuscita o la perdita di campioni costosi o scarsi, che può verificarsi riempiendoli dal retro. Quando il volume del campione è ridotto, riempire prima dal retro le micropipette di vetro con olio e poi il campione dalla punta può essere l’unica possibilità.

Posso usare il vecchio controller standard di WPI per azionare la testina Injector 300704?

La testina dell’iniettore WPI NANOLITER2020 (300704) richiede il controller MICRO2T (consigliato). È possibile utilizzare il controller MICRO4 di WPI per controllare la pompa. La testina dell’iniettore 300704 non può essere utilizzata con il vecchio controller standard di WPI.

Posso usare lo stesso controller MICRO2T che uso con la pompa UMP3? Mi serve un adattatore aggiuntivo per usare la pompa 300704 con il controller MICRO2T che ho già?

Sì, lo stesso controller MICRO2T può essere utilizzato per controllare la pompa UMP3 e il Nanoliter2010. Non è necessario alcun adattatore aggiuntivo. 300704 si collega direttamente al controller MICRO2T.

Posso azionare la pompa con un interruttore a pedale?

Sì, puoi usare l’interruttore a pedale 13142. Non è incluso nel sistema NANOLITER2020 e viene venduto separatamente.

Cosa devo fare se le micropipette di vetro si staccano dopo essere state fissate o se non riesco a caricare il campione dalla punta?

L’olio minerale inodore e incolore viene usato per riempire le micropipette di vetro. Quando la micropipetta di vetro è installata, le guarnizioni diventano troppo scivolose per tenerla in posizione a causa delle fuoriuscite graduali che si verificano con gli usi ripetuti. Usa i Kimwipes per assorbire l’olio fuoriuscito all’interno della testa dell’iniettore e all’esterno delle micropipette di vetro, e per pulire le guarnizioni. Se necessario, installa un nuovo set di guarnizioni per risolvere il problema.

Posiziono gli O-ring nell’ordine e nel verso corretti, come nel vostro video, ma la tenuta non è comunque ermetica. Cosa posso fare?

Se la guarnizione posteriore è allentata o montata al contrario, può verificarsi una perdita dal passaggio dell’aria. Questa guarnizione deve aderire saldamente al filo dello stantuffo. Se la pipetta viene sottoposta a una prova di trazione, la guarnizione può staccarsi facilmente da quella centrale, causando una perdita dovuta all’ingresso dell’aria. L’estremità posteriore del vetro deve essere liscia (e priva di crepe) e mantenuta saldamente premuta contro la sede centrale mentre si avvita la ghiera. La sede in plastica si deformerà leggermente e si «adatterà» all’estremità del vetro. I fluidi possono anche defluire spontaneamente, senza alcuna contropressione aggiunta, anche se la tenuta è buona; tuttavia, la quantità di miscelazione con una punta da 10 um è molto ridotta. Se una delle due guarnizioni posteriori lascia passare l’aria, si verificherà una perdita.