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Le cellule epiteliali ed endoteliali sono note per la loro funzione di barriera, come la permeabilità selettiva. Il tessuto polmonare è costituito da strati di cellule epiteliali, adiacenti agli strati endoteliali, che consentono lo scambio di ossigeno e anidride carbonica tra i polmoni e il sangue. Attualmente, la comunità della ricerca biomedica si concentra soprattutto sulla comprensione dei dettagli dell’infezione causata da questo nuovo coronavirus (2019-nCoV) o da virus simili. Questo nuovo virus può compromettere la normale capacità dei polmoni di eliminare le particelle estranee e la permeabilità selettiva, o funzione di barriera, dei polmoni può risultare gravemente compromessa. Gli effetti fisiologici avversi possono persistere una volta avviata la cascata infiammatoria.

Dal primo studio approvato di terapia genica umana nel 1989¹ (Rosenberg et al.), la terapia genica ha fatto molta strada nella medicina moderna e si sta affermando nelle cliniche e sul mercato in generale.^2,3 Il 2017 è stato un anno importante per la terapia genica: la FDA (Food and Drug Administration degli Stati Uniti) ha approvato Luxurna, il primo farmaco di terapia genica umana per una distrofia retinica ereditaria.

L’ossido nitrico (NO) è una molecola di segnalazione essenziale e svolge un ruolo significativo in numerosi sistemi fisiologici, tra cui il sistema nervoso centrale (SNC), il sistema cardiovascolare, il tratto gastrointestinale, il sistema immunitario e il sistema renale. ^1-5 Tuttavia, essendo altamente reattivo, è molto difficile rilevare e quantificare l’NO.^6,7 È necessario un sensore sensibile, selettivo per l’NO e facile da calibrare.

La microiniezione è il processo di trasferimento di materiale genetico in una cellula vivente usando micropipette di vetro o aghi metallici per microiniezione. Le micropipette di vetro possono avere dimensioni diverse, con diametri della punta compresi tra 0,1 e 10 µm. Il DNA o l’RNA viene iniettato direttamente nel nucleo cellulare. La microiniezione è stata usata con successo con grandi uova di rana, cellule e embrioni di mammifero, piante e tessuti. La microiniezione è stata costosa, può essere un processo lento e richiede personale qualificato, ma le nuove tecnologie la stanno rendendo ancora più affidabile, ripetibile e accessibile.

Tutti i reagenti chimici devono essere almeno di grado ACS, preferibilmente di grado HPLC. Questa procedura prevede l’uso di reagenti caustici e infiammabili. Consultare la scheda di sicurezza del produttore per le necessarie precauzioni di sicurezza.

Gli strumenti chirurgici con rivestimento nero non sono solo più attraenti dal punto di vista estetico rispetto a quelli in acciaio inossidabile, ma offrono anche diversi altri vantaggi, come indicato di seguito.

Che tu stia lavorando con i tuoi strumenti chirurgici sotto una luce intensa o utilizzando un microscopio, gli strumenti chirurgici neri antiriflesso offrono un vantaggio distintivo. Il rivestimento in titanio non solo indurisce e protegge il filo tagliente, ma riduce anche i riflessi sulla superficie degli strumenti durante il lavoro. Sono resistenti alla corrosione e biocompatibili. 

MICRO-ePORE™ penetratore cellulare di precisione è un sistema semplice e versatile che può essere utilizzato per facilitare la microiniezione di un'ampia varietà di composti e biomolecole negli ovociti e negli embrioni di mammiferi allo stadio preimpianto. La tecnologia brevettata in attesa di Flutter Electrode consente una penetrazione della membrana precisa, pulita e di piccole dimensioni, senza lacerarla né danneggiarla. Ciò aumenta notevolmente la vitalità degli embrioni.

Il nuovo MICRO-ePORE™ Pinpoint Cell Penetrator di WPI è un sistema semplice e versatile, utilizzabile per effettuare efficacemente la microiniezione di un'ampia varietà di composti e biomolecole in ovociti ed embrioni di mammifero allo stadio preimpianto. La tecnologia Flutter Electrode, in attesa di brevetto, consente una penetrazione della membrana piccola, pulita e precisa, senza lacerarla né danneggiarla. Qui Gabe prepara il sistema e collega tutti i componenti.

Per gli studi intracellulari doppi o differenziali, il Duo773 di WPI dispone di controlli separati della capacità negativa e di un filtro attivo integrato che consente di bilanciare con precisione le costanti di tempo per misurazioni differenziali prive di artefatti. Include due preamplificatori per sonde, sonde da 10¹⁵Ω e 10¹¹Ω per monitorare i segnali provenienti da microelettrodi iono-selettivi e da elettrodi riempiti di KCl. Jim ti mostra come disimballare in sicurezza e configurare correttamente il tuo nuovo Duo773.

Ecco alcune domande frequenti (FAQ) sui microelettrodi metallici. Fai clic sulla domanda per visualizzare la risposta.

Prima di sterilizzare gli strumenti chirurgici, è buona norma assicurarsi di averli puliti per rimuovere sangue, tessuti e ogni altro materiale organico. Se i residui si asciugano o si cuociono sugli strumenti, interferiscono con l'inattivazione microbica e possono compromettere il processo di sterilizzazione.

Le camere EndOhm WPI si usano con lo strumento EVOM2 di WPI per effettuare misurazioni della TEER (resistenza elettrica transepiteliale). Ogni camera EndOhm è dotata di un disco distanziatore per calibrare lo spazio tra i due elettrodi della camera. Uno spazio uniforme garantisce misurazioni affidabili. Qui Subhra mostra come calibrare le camere.

L’Istituto Butantan, un ente collegato al Dipartimento della Salute dello Stato di San Paolo e uno dei più grandi centri di ricerca biomedica al mondo, ha tenuto a dicembre la quarta edizione del corso universitario di perfezionamento in allevamento e gestione del pesce zebra, durante il quale ha presentato il Sistema di microiniezione WPI per pesci zebra.

La resistenza elettrica transepiteliale (TEER), detta anche resistenza transepiteliale (TER), viene utilizzata per monitorare la salute cellulare. La TEER comprende le misurazioni della via transcellulare (ovvero la resistenza dovuta a una singola cellula) e della via paracellulare (ovvero la resistenza dovuta alla formazione delle giunzioni cellulari). La TEER viene comunemente utilizzata per monitorare la confluenza cellulare. I valori di TEER possono indicare variazioni della permeabilità del monostrato cellulare, mostrando la funzione di barriera del monostrato in cellule quali quelle endoteliali (dei microvasi cerebrali) ed epiteliali (alveolari, renali e intestinali). Valori elevati di TEER riflettono generalmente monostrati cellulari o giunzioni cellulari più compatte (Lewis 1996, Matter and Balda 2003, Denker and Sabath 2011). Di seguito sono descritti alcuni dei principali vantaggi dei sistemi di misurazione TEER WPI. I valori di TEER (analisi elettrofisiologica) possono essere combinati con altri metodi di analisi per comprendere meglio un fenomeno biologico. Per esempio, una diminuzione del valore di TEER può indicare un aumento della permeabilità del monostrato, che può essere ulteriormente confermato con un saggio che utilizza una molecola tracciante (fluoresceina-destrano).

Jonas de Jesus, di WPI Brasil, fa visita al vincitore del concorso per dare un nome alla mascotte dello Zebrafish Network. Jonas ha consegnato al vincitore un kit chirurgico per la ricerca sul pesce zebra.

L’unico limite agli usi pratici delle celle capillari a lunghezza d’onda liquida (LWCC) di WPI è l’immaginazione; nella comunità della spettroscopia a fibre ottiche sono note anche come celle a flusso a cammino ottico lungo. Questo accessorio di campionamento a fibre ottiche per misure di assorbanza combina cammini ottici più lunghi con piccoli volumi di campione, rendendolo ideale per l’analisi dell’acqua, ad esempio del CDOM.

Quando hai bisogno di prelevare rapidamente piccoli campioni con una procedura minimamente invasiva, la fustella bioptica è la scelta più semplice. La fustella bioptica è uno strumento manuale a forma di matita, con un corpo sottile simile a una matita. È leggera e dotata di una punta tagliente circolare cava in acciaio inossidabile.

Quando scegli strumenti chirurgici per una procedura, ecco alcuni aspetti importanti da considerare

• Quale procedura eseguirai? Gli articoli di ricerca pubblicati indicano solitamente quali strumenti sono stati utilizzati da altri ricercatori per procedure simili. Lo strumento chirurgico giusto per una determinata procedura influisce sul risultato della tecnica.
• Quanto è grande il soggetto? Uno strumento perfetto per un ratto di 200­–300 g (lungo circa 22–25 cm) potrebbe non essere la scelta migliore per un topo neonatale di circa 15 g (lungo circa 1–2,5 cm).
• Con quale frequenza userai lo strumento? Se esegui più di 100 tagli al giorno, vale la pena considerare un paio di forbici in titanio o un paio di forbici con inserti in carburo di tungsteno. Rimangono affilate più a lungo.

In questo video vedrai come sostituire la guarnizione in un >Nanoliter2010. 

NOTA: NANOLITER2010 è stato sostituito da NANOLITER2020