VIDEO: Un ricercatore confronta EVOM3 con una camera di Ussing
di Benjamin Dubansky, PhD, fisiologo animale/ricercatore
La camera di Ussing viene utilizzata per studiare la barriera di un tessuto epiteliale espiantato. È possibile effettuare misurazioni simili in piastre multiwell con un misuratore TEER della serie EVOM, utilizzato per i tessuti epiteliali coltivati fino a raggiungere la confluenza in un pozzetto di coltura cellulare. Sebbene le misurazioni con EVOM siano solo qualitative, con un EVOM3 è possibile analizzare molti più campioni. I misuratori EVOM sono portatili e molto più economici di una camera di Ussing. Qui Ben Dubansky, PhD, spiega le differenze tra i misuratori EVOM e le camere di Ussing.
EVOM è un tipo speciale di voltmetro che misura le proprietà elettriche attraverso uno strato di cellule in coltura o una membrana biologica. Misuriamo la TEER (TER) - resistenza elettrica transepiteliale. EVOM3 ci consente di ingrandire e misurare la resistenza o la tensione ai capi di queste membrane o cellule in coltura.
EVOM3 a confronto con una camera di Ussing
Tessuto espiantato o tessuto in coltura
EVOM3 può sembrare simile alla camera di Ussing, ma non lo è del tutto. La camera di Ussing genera un campo uniforme attraverso la membrana, consentendo di applicare una tensione costante all'epitelio e di monitorare in modo più uniforme l'intero strato epiteliale contemporaneamente. La camera di Ussing è pensata soprattutto per il tessuto espiantato. Per esempio, si può prelevare un pezzo di intestino e coltivarlo in una camera di Ussing per studiarne il trasporto o le proprietà di barriera, come descritto sopra.
Campione singolo o analisi ad alta processività
Lo svantaggio di una camera di Ussing è che si possono analizzare solo un paio di campioni alla volta. Una camera di Ussing non è certo una piastra a 24 pozzetti. Esistono modi per adattare EVOM3 e ottenere dati simili a quelli di una camera di Ussing con una processività maggiore. Sebbene EVOM3 non sia preciso quanto una camera di Ussing, è comunque una piattaforma affidabile e consente di analizzare molti più campioni.
Migliorare la precisione di EVOM3 con EndOhm
Il modo più semplice per usare EVOM3 è effettuare le misurazioni durante un esperimento per monitorare eventuali cambiamenti nel corso di un trattamento. In alternativa, si può utilizzare la configurazione con elettrodi EndOhm . Sebbene EVOM3 non sia preciso quanto una camera di Ussing, la serie EVOM, soprattutto i modelli più recenti (EVOM3), consente comunque di ottenere dati simili a quelli di una camera di Ussing.
Se occorre una maggiore precisione, è possibile utilizzare la configurazione con elettrodi EndOhm, che si collega a EVOM3. In questo caso, bisogna rimuovere l'inserto e posizionarlo in una camera con elettrodi perfettamente allineati, un po' come in una camera di Ussing. È una soluzione ben progettata per ottenere misurazioni rapide e coerenti. Sarà necessario spostare gli inserti. È un processo più lento, ma, se si pulisce con cura e si mantiene la sterilità, gli elettrodi EndOhm sono straordinari. Sono decisamente più lenti, quindi la processività è inferiore, ma sono molto più veloci di una camera di Ussing. Inoltre, si utilizzano cellule in coltura.
Sebbene EVOM3 non sia preciso quanto una camera di Ussing, è comunque una piattaforma affidabile e consente di analizzare molti più campioni. Con un misuratore portatile EVOM3 si ottengono dati qualitativi solidi a una frazione del costo di un sistema Ussing completo.
