Sequenza di iniezione della MICRO-ePUMP spiegata
Panoramica di MICRO-ePUMP
Progettata per semplificare l’iniezione intracellulare e varie altre operazioni di microiniezione, MICRO-ePUMP utilizza una pressione dell’aria regolata con precisione per iniettare fluidi nelle cellule. I volumi iniettati variano da picolitri a nanolitri. I tempi, la pressione di iniezione e la pressione di compensazione si regolano indipendentemente tramite l’interfaccia touchscreen. Gli intervalli di tempo possono variare da 2 secondi fino a 10 ms o meno, a seconda dell’impostazione della pressione di iniezione. L’intervallo di pressione di iniezione si attiva tramite l’interruttore a pedale.
MICRO-ePUMP è progettata per iniettare quantità molto ridotte di fluidi, come i farmaci, nelle cellule o nei piccoli organelli. È possibile applicare due diverse pressioni positive mediante un circuito di temporizzazione di precisione che passa automaticamente da una pressione all’altra.
- La porta fornisce una pressione positiva per l’espulsione ad alta pressione.
- La porta di pressione mantiene una bassa pressione positiva di “compensazione” sulla pipetta di iniezione tra un impulso di iniezione e l’altro, per impedire l’aspirazione del fluido per capillarità.
MICRO-ePORE integrato per facilitare la penetrazione
La tecnologia MICRO-ePORE™ Pinpoint Cell Penetrator di WPI è integrata in MICRO-ePUMP. Quando il ricercatore attiva MICRO-ePORE™, il dispositivo eroga un segnale di tensione altamente localizzato nel sito di iniezione desiderato per facilitare la penetrazione con un trauma minimo. Il ricercatore determina l’ampiezza e la frequenza del segnale più adatte all’applicazione. Il segnale viene generato nell’unità di controllo e trasmesso attraverso il cavo di interfaccia dell’elettrodo al supporto del microelettrodo. Un filo d’argento trasmette il segnale alla sostanza elettricamente conduttiva da iniettare. Un elettrodo di riferimento porta il mezzo a un potenziale di 0,0 V rispetto alla tensione generata.
Comprendere la sequenza di iniezione di MICRO-ePUMP
Ecco una pratica infografica che descrive la sequenza degli eventi durante un’iniezione con MICRO-ePUMP. Diversi eventi si verificano quasi simultaneamente. L’infografica mostra i vari punti di attivazione e illustra cosa accade in ciascuna fase. Gli eventi di attivazione sono mostrati in ordine cronologico lungo la parte inferiore e il grafico mostra lo stato di questi elementi durante gli eventi:
- Il tipo di pressione applicata (pressione di compensazione o pressione di iniezione)
- La posizione dell’interruttore a pedale (non premuto, premuto a metà, premuto completamente)
- La posizione della pipetta (nella soluzione tampone, all’interno della cellula)
- I segnali acustici (nessun suono, segnali di esito positivo o negativo, tono di iniezione)
- L’applicazione della tensione (nessuna tensione applicata, tensione di misurazione della continuità, tensione di iniezione)
Sequenza degli eventi durante un’iniezione
1. Per eseguire un’iniezione, posizionare innanzitutto la pipetta nella soluzione tampone. Quindi, premere l’interruttore a pedale a metà, fino alla prima posizione. L’interruttore a pedale avvia il test di continuità del circuito, che dura 400 ms. Durante questi 400 ms:
- MICRO-ePUMP mantiene la pressione di compensazione per impedire l’aspirazione del fluido per capillarità.
- Durante il test di continuità non si sente alcun suono.
- La tensione sale al valore di misurazione della continuità, quindi scende al valore di tensione di iniezione programmato al termine del test di 400 ms.
2. Subito dopo il completamento del test di continuità si sente uno dei due segnali acustici.
- Un tono basso indica che non è stato possibile verificare la continuità del circuito ed è necessario ricontrollare la configurazione prima di procedere con l’iniezione.
- Un tono alto segnala che la continuità del circuito è stata verificata e che è possibile procedere.
Al termine del test, la tensione scende al valore di tensione di iniezione programmato. MICRO-ePORE si attiva ed è pronto a penetrare nella cellula, a seconda dell’esito del test di continuità.
3. Se il test di continuità è stato superato, è possibile spostare la pipetta all’interno della cellula. Al momento della penetrazione:
- La pressione di compensazione viene mantenuta.
- Il pedale è ancora premuto a metà.
- Il tono del test di continuità continua a essere emesso.
- La tensione di iniezione viene mantenuta, quindi MICRO-ePORE è attivo.
4. Non appena la pipetta penetra nella cellula, è possibile premere l’interruttore a pedale fino in fondo (seconda posizione). A quel punto:
- MICRO-ePUMP aumenta la pressione fino al valore di iniezione e la mantiene per il tempo di iniezione programmato.
- Durante l’iniezione non si sente alcun suono.
- La tensione di MICRO-ePORE scende a zero e vi rimane fino all’inizio del ciclo di iniezione successivo.
5. Al termine dell’iniezione:
- La pressione di MICRO-ePUMP scende al valore di compensazione.
- L’interruttore a pedale resta premuto completamente.
- La pipetta rimane nel campione.
- Viene emesso un breve tono distinto per indicare che l’iniezione è stata effettuata.
6. A questo punto è possibile rimuovere la pipetta dal campione; tutti gli altri elementi rimangono invariati.
7. Infine, è possibile rilasciare l’interruttore a pedale. Ora è tutto pronto per ripetere il ciclo di iniezione con un nuovo campione.
Scarica l’infografica
Il ciclo di iniezione si svolge in pochi secondi, ma l’infografica mostra chiaramente come interagiscono tutti gli eventi di attivazione e gli elementi interessati. Vedere il processo rappresentato graficamente può aiutarti a familiarizzare con ciò che accade durante ciascuna fase di ogni iniezione. Puoi scaricare l’infografica pronta per la stampa e affiggerla nel tuo laboratorio.
Per qualsiasi domanda, chiamaci al numero (866) 606-1974 (numero verde negli Stati Uniti) oppure scrivici all’indirizzo wpi@wpiinc.com.
