自動データ記録機能付きTEER測定用EVOM™手動メーター

ブランク機能は、電極や液体の抵抗など、膜からの測定値ではないものを差し引きたい場合に使用します。

いいえ、TEER測定には面積の計算が必要です。TEERを計算するには、測定された抵抗値に適切な表面積（以下）を掛けます。例えば、12 mmのインサートで565 Ωを測定した場合、TEERは565 Ω × 1.13 cm2 = 638.5 Ω・cm2となります。以下は、一般的に適用されるさまざまなトランスウェル／インサート形式の表面積です：6ウェルプレート（24 mmインサート）4.52 cm2、12ウェルプレート（12 mmインサート）1.13 cm2、24ウェルプレート（6.5 mmインサート）0.33 cm2、96ウェルプレート（4.3 mmインサート）0.14 cm2。自動TEER測定には、WPI REMS自動TEER測定システムの使用を検討してください。

設定を開き、ストアメニューから「新しいプレート」を押してメモリ内のデータをクリアします。これで以前の測定値がすべて消去されます。メイン画面に戻り、プレビュー画面を開いて、測定するウェルを選択します（選択したウェルは緑色になります）。電極をセットして測定してください。選択したウェルの測定が終わったら、設定を開き、ストア画面メニューを押してから「新規保存」を押し、プレートデータをUSBドライブに保存します。

使用後はEVOM™マニュアルをラミナーフードから取り出してください。次回はフード内のUVをオンにします。UVでフードが消毒されたら、UVをオフにし、次に70〜100％のエタノールまたはイソプロパノールをペーパータオルにスプレーしてEVOM™マニュアルを拭いてください。アルコールをEVOM™マニュアルに直接スプレーしないでください。

生の抵抗値の変化が見られることが予想されます。ただし、サンプル値（細胞入りのトランスウェル）からブランク値（細胞なしのブランクトランスウェル）を差し引きます。こうすることで、増加した体積によるブランク値を増加した体積のサンプルから差し引くことになります。したがって、体積増加による抵抗の変化は除外されます。実験内のすべてのサンプルで同じ体積を一貫して使用してください。

ドリフト–時間の経過とともに（電圧または抵抗のいずれかが）継続的に大幅に増加または減少する読み取り値。例：1000 Ωで、読み取り値が毎分100 Ωずつ増加している。（毎分10 Ωのドリフトは許容範囲です。）過度のドリフトはpHや温度の変化、または電極の清掃が必要な場合に起こることがあります。

このドリフトの原因となりうる要因はいくつかあります。

• 電極が培養液に完全に浸かっていることを確認し、プレート内の液体温度が室温で平衡化するかプレートウォーマーを使用して一定であることを保ってください。
• ドリフトのもう一つの一般的な原因は、電極の先端に細胞培養液の成分が付着していることです。
• 電極（先端）は使用頻度に応じて週に最大1回、酵素洗浄（ターガザイムまたはエンゾール）を行う必要があります。
• ハンドヘルド電極は測定中できるだけ動かさないようにしてください。
• 過度の動きは測定値の変動を引き起こします。
• さらに、5% CO2環境ではCO2の損失により培地のpHが変化し、抵抗値の読み取りが変わることがあります。これは主に数分ではなく数時間にわたる連続測定の文脈で適用されます。

温度はTEER値に影響を与えることが知られています。安定した値を得るために、一定の温度を維持することをお勧めします。測定は細胞培養液／バッファー中で行われるため、実験中に使用する培養液／バッファーを温めるために一定温度のウォーターバスを使用することを推奨します。一定の培養液／バッファー温度は一貫した実験条件を保証します。測定前に、培養インサート上で培養された細胞を含むウェルプレートをインキュベーターから少なくとも20分間取り出し、室温で安定させることをお勧めします。 

EndOhmチャンバーを使用する場合は、上部電極と下部電極の間の距離を一定に保ち、安定した測定値を得るようにしてください。チョップスティック電極（STX2）を使用する場合は、測定中に垂直の位置を保つようにしてください。実験中にチョップスティック電極の保持位置を一定に保つことで、一貫した測定結果が得られることが期待されます。

アピカル側（例：細胞培養インサートの上部）とバソラテラル側（例：12ウェルプレート内の細胞培養インサートの下部）で、同じイオン濃度の同じ液体を使用することを推奨します。測定中にアピカル側で1X PBSバッファーを使用する場合は、バソラテラル側でも1X PBSバッファーを使用することをお勧めします。また、圧力差を最小限に抑えるために、培養インサートの内外の液面の高さを同じにすることを推奨します。実験中は、膜がフィルターから外れないように、まずアピカル側のウェルを液体で満たします。

すべての実験で一定量の液体（培養液／バッファー）を使用することで、データのばらつきを減らすことができます。

この EVOM2 は、「ブランク」と呼ばれるウェルを測定すると、この最初の抵抗測定に電極抵抗、電極間隙、液体媒体の体積とモル濃度による抵抗の合計が含まれるという原理で動作します。（電極の電荷差は EVOM2の極性を反転させて結果を平均する測定方法によって打ち消されます。）

ウェルの連続的な周期測定は抵抗測定による膜の成長のプロットであり、この抵抗グラフが安定したら、膜がコンフルエント（連続的に成長）したと言えます。 EVOM2 システムは電圧クランプアンプや Ussingシステムと同様に動作しますが、特別なUssingチャンバーは使用しません。

この EVOM2 システムはUssingほど正確ではありませんが、 EVOM2 システムの目的は膜がコンフルエントかどうかを判断することであり、詳細な分析を行うことではありません。（膜の透過性分析の一部は EVOM2  システムで変化率として研究できますが、絶対値としてではありません。）

TEERの結果に影響を与えるいくつかの実験変数には、以下のようなものがあります：

• 温度、
• 電極の状態と配置、
• 細胞の種類と培養条件、
• 培地の組成

細胞が増殖して密な単層を形成するためです。最初は播種後にTEERが低く、その後細胞が増殖して膜の隙間を覆い、連続したバリアを形成するにつれて上昇します。

TEERは、薬物の透過性および吸収研究、血液脳関門の研究、毒性および細胞毒性試験、組織および細胞培養のモニタリングにおいて、細胞バリア機能と透過性を評価するために広く使用されています。

いいえ — TEERは非破壊的です。細胞を傷つけることなく、時間をかけてバリアの完全性を繰り返し測定できます。

高TEER → 強く、損なわれていない細胞バリア。

低TEER → 弱い、または透過性のある細胞層。

一部のモデル（例：肺胞細胞）では、正確な測定のためにバッファーや培地が必要な場合があります。

TEERは細胞成長面積で正規化された抵抗値（Ω·cm²）であり、生の抵抗測定値から計算されます。

ケーブル部分を持って電極を扱わないでください。内部の接続が徐々に物理的に破損する可能性があります。

矢印で示された部分（プラスチック）を持って電極を扱ってください。

液体の浸漬やスプレーのレベルはここまでに制限してください（最大）。液体が内部のケーブルやコネクターに入り込むのを防ぐためです。電極の残りの部分は、イソプロパノールまたはエタノールをスプレーしたペーパータオルで拭いてください（直接スプレーしないでください）。

500 Ωで不安定な場合、測定値が450から550 Ωに跳ね上がり安定しません（500 Ω範囲では±5 Ωの不安定さは許容されます）。より高い範囲では、100K範囲で±1000 Ωまで許容されます。不安定な電極は酵素洗浄が必要な場合があります。

• 読み取りの不安定さの最も一般的な原因は、チップを溶液に完全に浸すか、酵素洗浄を行うことで解決できます。
• 電極チップが適切な導電性液体（培地またはバッファー）に完全に浸っていません。液面を電極チップの高さまで追加してください。（一貫した比較のために、頂端側と基底側の体積を一定にしてください。）電極チップ（感知領域）に細胞培養培地の成分が付着している場合があり、これは酵素洗浄で解決できます。

はい、EndOhmsは2種類あります。レガシーEVOM2 EndOhms（ENDOHM-6G、ENDOHM-12G、ENDOHM-24G-SNAP）は53330-01ケーブルを使用し、新しいEndOhms（EVM-EL-03-01-0x）はEVOM™マニュアルと互換性があり、99916ケーブルを使用します。