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TEER測定

電気抵抗と経上皮電気抵抗(TEER)は同じものですか?

いいえ。TEER値は、上皮ボルトメーター(例えば、EVOM2)で得られた生の抵抗値に細胞の成長面積(例:細胞培養インサート上に成長した細胞単層の面積)を掛けて算出します。

例えば、0.5 cm^2の面積を持つ細胞培養インサート上に細胞を培養した場合。

上皮ボルトメーター(例:EVOM2)の抵抗値の読み取り値が300 Ωであったとします。

TEER= 300 Ω × 0.5 cm^2 = 150 Ω- cm^2

エンドオームとは何ですか?

EndOhmはEVOM2用に設計されたチャンバーで、取り外し可能なウェルをセットして抵抗測定を行います。このチャンバーには固定位置に電極が配置されており、電極の位置と安定性が組織抵抗の測定に大きな影響を与えます。

EVOM2はコンフルエンスの測定にどのように使われますか?

EVOM2は、「ブランク」と呼ばれるウェルの最初の抵抗測定値に基づいて動作します。この最初の抵抗測定値には、電極抵抗、電極間隙、および液体媒体の体積とモル濃度による抵抗の合計が含まれています。(電極の電荷差は、EVOM2の極性を反転させて結果を平均化する測定方法によって打ち消されます。)ウェルの連続的な定期測定は、抵抗測定による膜の成長のプロットであり、この抵抗グラフが安定した段階に達すると、膜がコンフルエント(連続的に成長した状態)に達したと言えます。EVOM2システムは、ボルテージクランプアンプやUssingシステムと同様に機能しますが、特別なUssingチャンバーは必要ありません。EVOM2システムはUssingほど正確ではありませんが、その目的は膜がコンフルエントかどうかを判断することであり、詳細な分析を行うことではありません。(EVOM2システムで膜の透過性の一部分析を行うことも可能ですが、絶対値の変化ではなく変化の割合として評価されます。)

なぜSTXではなくEndOhmを使うのですか?

EVOM2は、電流が最も抵抗の低いポイントを通るため、まず膜のピンホールや空洞を検出します。STX2の汎用電極は柔軟に曲がり、電極間の間隔を変えることができ、またウェル内で固定せずに動かすことが抵抗誤差を大きくする原因にもなります。一方、EndOhm電極は位置が固定されています。適切に管理され、培地で前処理されると、最も安定した再現性の高い信頼できる抵抗測定値を提供します。中央に配置された同心円状の電極の追加により、膜全体が電流の流れにさらされ、STX2のように端に配置された場合に生じる影の領域がなくなります。(なお、組織の基準となるTEER値が低抵抗の場合、大面積膜の測定が難しくなることがあります。例えば、TEER値が200Ω・cm²の場合、12mmウェルでは同じコンフルエント測定で1.13倍低くなり(176.9Ω)、24mm直径のウェルでは4.52倍低くなり44.2Ωとなります。抵抗値が約100Ωを下回ると、電極の不安定性が増し、測定値が変動しやすくなります。安定した測定のためには、電極の「洗浄」と前処理が不可欠であることがわかっています。)

電極の掃除方法は?

電極の洗浄は、定期的に酵素洗浄剤(Enzol、Tergazyme)を使用するか、無香料の家庭用漂白剤(3% NaClO)に浸すことから成ります。漂白剤はAg表面をAgClに再コーティングし、蓄積したタンパク質を溶解します。これらの効果は電極の不安定性を引き起こします。酵素洗浄剤は、DMEMのような培地成分によって電極に付着した残留物を安全に除去するための薬剤です。これが蓄積すると、抵抗値が上昇し、不安定になることもあります。

電極の事前処理はどうですか?

電極の前処理とは、測定媒体に電極を一定時間浸すことで、透過性ペレットから異物の液体が移動するのを促すことです。アルコールはこれらの電極を滅菌するためによく使われますが、アルコールが電極に浸透すると電気抵抗が高くなります。アルコールが電極内部の生理食塩水ベースの媒体とゆっくりと置換されるにつれて、抵抗値の測定結果は徐々に低下する傾向が見られます。

TEER用のシンプルなデータ取得システムを教えてもらえますか?

Lab-Trax-4は静かな12ビット、4チャンネルのアナログ-デジタルデータレコーダーで、最大10,000サンプル/秒、または4チャンネルすべてで2500 s/Sのサンプリング速度を持っています。このユニットはUSB2ポートから直接電源供給され、フィールドでのノートパソコンでの携帯用ユニットとして使用できます。ハードウェアには必要に応じて4つのデジタル入力と4つのデジタル出力があります。 LabScribe3ソフトウェアは使いやすく、最新のニーズに対応するために頻繁に更新されています。Microsoftが新しいオペレーティングシステムにアップデートを続ける中、ハードウェアはLabScribeの新しいバージョンでも引き続きサポートされます。また、MacおよびLinuxベースのコンピューターでもサポートされています。STX2を使ってこれらの測定を行う場合、テキスト入力のためにもう一人手が必要になるかもしれません。測定前にMarksフィールドにテキストを入力しておけば、TEERの読み取りが安定したときにEnterキーを押すだけでマークを付けられます。STX100を使用している場合は、手が自由になりメモを取ることができます。

TEER測定で直面する可能性のある課題は何ですか?

これはSTX2の問題に対処するために書かれましたが、EndOhmにも当てはまります。 これらの項目はいずれも抵抗値の測定に影響を与える可能性があります: • 電極間隔。STX2の電極間隔を広げたり圧縮したりしないでください。 • 電極抵抗。電極は清潔に保ち、適切に管理してください。 • 電極の深さ。電極は常に少なくとも2mm沈めてください。 • プラスチック壁の近くの電極。可能であれば、電極をプレートの壁から離して配置してください。 • 電極の配置。通常、電極の長い脚を底板に置く場合は、一貫性を保つために同じ配置を繰り返してください。 • 液体の抵抗。培地が蒸発しないようにし、希釈もしないでください。 • 液面の高さ。測定ごとに同じ液量を維持するようにしてください。小さな変動でも小さなインサートでは大きな影響を与えることがあります。 過度の動き。電極をできるだけ動かさないようにしてください。場合によっては、機械式の電極ホルダーを使用することもあります。 • 洗浄や培地交換は、細胞培養インサートの膜に破損を引き起こす可能性があります。液体の交換はインサートの壁に沿って慎重に行ってください。膜からわずかに剥がれた組織や細胞層の隙間ができると、EVOM2が低い抵抗値を読み取る明確な経路が開いてしまいます。電流は細胞単層を含む膜を通るのではなく、この隙間を通って漏れるため、電気は抵抗の少ない経路を通る傾向があります。このような場合、抵抗値が急激に低下するのがわかります。抵抗値が大幅に下がった場合は、顕微鏡でサンプル(例:細胞培養インサート上の細胞単層)を確認し、フィルターの破損や細胞の塊が剥がれて大きな空洞ができていないかを調べることをお勧めします。 同じウェルで複数回(3~5回)測定し、その平均を計算することで変動を減らすことができます。

一貫したTEER結果を得るために制御可能な実験パラメータをいくつか提案していただけますか?

• 温度はTEER値に影響を与えることが知られています。安定した値を得るために、一定の温度を維持することをお勧めします。測定は細胞培養液やバッファー中で行われるため、実験中に使用する培養液やバッファーを一定温度に保つために、温度固定のウォーターバスを使用することを推奨します。一定の培養液/バッファー温度は、安定した実験条件を保証します。測定前に、培養インサート上で培養された細胞を含むウェルプレートをインキュベーターから少なくとも20分間取り出し、室温で安定させることをお勧めします。 • EndOhmチャンバーを使用している場合は、上部電極と下部電極の間の距離を一定に保ち、安定した測定値を得るようにしてください。チョップスティック電極(STX2)を使用している場合は、測定中は垂直の位置で保持するようにしてください。実験中にチョップスティック電極の保持位置を一定に保つことで、安定した測定値が得られることが期待されます。 • アピカル側(例:細胞培養インサートの上部)とバソラテラル側(例:12ウェルプレートのウェル内にある細胞培養インサートの下部)で、同じイオン濃度の同じ液体を使用することを推奨します。測定中にアピカル側で1X PBSバッファーを使用している場合は、バソラテラル側でも1X PBSバッファーを使用することをお勧めします。また、圧力差を最小限に抑えるために、細胞培養インサートの内外の液面の高さを同じにすることを推奨します。実験中は、膜がフィルターから外れないように、まずアピカル側のウェルに液体を注ぎます。 • すべての実験で一定量の液体(培養液/バッファー)を使用することで、データのばらつきを減らすことができます。

肺胞上皮細胞のTEERを、頂側に培地を入れずに培養した状態で測定したいと考えています。これらの単層のTEERを測定するために、頂側に培地やバッファーを加える必要はありますか?

はい。簡単に言うと、電極(例:EndOhm/STX2)は液体(細胞培養培地/バッファー)を介して電気的接続を維持します。細胞培養インサートの上部に液体がないと、電気的接続が途切れてしまいます。ただし、これらの細胞は頂側で培地なしで培養されているため、頂側の液体への曝露はできるだけ短時間にすることをお勧めします。頂側の培地やバッファーに約5分間曝露しても細胞に影響はないと考えて差し支えありません。頂側の液体に細胞が耐えられる時間を判断するために、パイロット実験を行うことをお勧めします。前述の通り、頂側と基底側の両方で同じイオン濃度の同じ液体(例えば、1X PBSバッファーや培地)を使用することを推奨します。

カーディオフィズ

CARDIOPHYSには出力ケーブルが付属していますか?

CARDIOPHYSシステムには、CBL102(BNC - 3.5 mmミニフォンプラグ)のような出力ケーブルは含まれていません。これは、データ収集システムが顧客がすでに持っているものによって異なるためです。もし顧客がすでにデータ収集システムをお持ちの場合、CARDIOPHYSをそのシステムに接続するためのケーブルをご用意できる場合があります。CARDIOPHYSの出力接続は3.5 mmミニフォンプラグです。顧客がデータ収集システムをお持ちでない場合は、CARDIOPHYSとともにLAB-TRAX-4、505195(心電図解析モジュール)、2851、およびCBL-102ケーブルを提供しています。3.5 mmミニフォンプラグを持つケーブルは2種類のみ提供しています:CBL100 - 3.5 mmミニフォンプラグから3.5 mmミニフォンプラグへのケーブルと、CBL102 - 3.5 mmミニフォンプラグからBNC(オス)へのケーブルです。

dPatch

dPatch®は市場にある他のアンプと比べてどう違いますか?

dPatchは最新のデジタルアーキテクチャを採用しています。ヘッドステージ付近で信号をアナログからデジタルに変換することで、信号の完全性を可能な限り維持しています。dPatchのほぼすべてのノイズ仕様は、市場にある他のすべてのアンプを上回っています。さらに、dPatchは完全なパッチクランプシステムを構成しており、すべてのデータ取得ハードウェアおよびソフトウェアが含まれており、ダイナミッククランプに外部ハードウェアは不要です。(比較表をご覧ください)

なぜdPatchにはアクティブ冷却機能がないのですか?

アクティブ冷却は、長期的には実際に「ノイズ」を増やす多くの問題を引き起こします。ペルチェ素子によって発生する熱はマニピュレーターに熱ドリフトをもたらし、シングルチャネル作業中に安定したパッチを維持することをほぼ不可能にします。マイクロマニピュレーターを製造する企業として、私たちは電気生理学装置全体のシステム性能に非常に敏感です。アクティブ冷却は紙上でわずかに良いノイズ仕様を得るのに役立つことがありますが、実際の現場ではそのわずかな仕様上の利点よりも欠点の方がはるかに大きいです(比較表をご参照ください)。さらに、ペルチェ素子の寿命が限られているため、私たちが受け入れられない信頼性の問題が生じます。

dPatchを使うのに、デジタイザーやソフトウェアを購入する必要がありますか?

いいえ、dPatchはもともとデジタル設計のため、追加のデジタイザーは必要ありません。SutterPatch®ソフトウェアとIgorProのライセンスはすべてのdPatchシステムに含まれています。dPatchには実験を開始するために必要なすべてが揃っています。

後からシングルヘッドステージのdPatchシステムにセカンドヘッドステージを追加できますか?

はい、dPatchのヘッドステージ/プリアンプユニットは交換可能で自己完結型です。すべてのキャリブレーションおよび調整情報はヘッドステージ/プリアンプユニットに直接保存され、起動時に読み取られます。これにより、2台目のヘッドステージの追加が簡単になります。

ヘッドステージは、私の既存のマイクロマニピュレーターに取り付けられますか?

すべてのSutter Instrumentのヘッドステージには標準的なドブテイルフィッティングが付属しています。このフィッティングは約30年前にSutter InstrumentとAxon Instrumentsによって共同で導入され、その後ほとんどのパッチクランプアンプやマイクロマニピュレーターのメーカーに採用されました。そのため、Sutterのヘッドステージは既存の装置にそのまま取り付けられ、多くの場合、調整も不要です。

EVOM™ マニュアル

EVOM™マニュアルはEndohmと一緒に使えますか?

はい、ただし99672アダプターまたは新しいEVOM3/EVOMマニュアルケーブル99916が必要です。

なぜ空白機能を使いたいのですか?

ブランク機能は、電極や液体の抵抗など、膜以外の測定値を差し引きたい場合に使用します。

EVOM™ マニュアルシステムはTEERを自動で計算しますか?

いいえ、TEER測定には面積の計算が必要です。TEERを計算するには、測定された抵抗値に適切な表面積(以下)を掛けます。例えば、12 mmのインサートで565 Ωを測定した場合、TEERは565 Ω × 1.13 cm2 = 638.5 Ω・cm2となります。以下は、一般的に適用されるさまざまなトランスウェル/インサート形式の表面積です:6ウェルプレート(24 mmインサート)4.52 cm2、12ウェルプレート(12 mmインサート)1.13 cm2、24ウェルプレート(6.5 mmインサート)0.33 cm2、96ウェルプレート(4.3 mmインサート)0.14 cm2。自動TEER測定には、WPI REMS自動TEER測定システムの使用を検討してください。

EVOM™ マニュアルデータは、最後のウェルに到達すると自動的に保存されます。96個のウェルのうち8個だけを測定したい場合、どのようにデータを保存すればよいですか?

設定を開き、ストアメニューから「新しいプレート」を押すことで、メモリ内のデータをすべてクリアできます。これにより、以前の測定データが消去されます。メイン画面に戻り、プレビュー画面を開いて、測定するウェルを選択します(選択したウェルは緑色に変わります)。電極を設置し、測定を行います。選択したウェルの測定が完了したら、設定を開き、ストア画面メニューを押してから「新規保存」を押し、プレートデータをUSBドライブに保存してください。

EVOM™マニュアルと電極をラミナーフード内で長時間UV光にさらす場合、どのように保管すればよいですか?

使用後はEVOM™マニュアルをラミナーフードから取り出してください。次回使用時には、フード内のUVをオンにします。UVでフードが消毒されたら、UVをオフにし、次に70~100%のエタノールまたはイソプロパノールをペーパータオルにスプレーしてEVOM™マニュアルを拭いてください。アルコールをEVOM™マニュアルに直接スプレーしないでください。

なぜ、サンプル内にSTX4電極が入っているのに、EVOM™マニュアルで読み取り値がダッシュ(—)になるのでしょうか?

電極が空気中にあるか液体に部分的にしか浸っていない場合、不安定な読み取り値が記録されるためダッシュが表示されることがあります。電極先端部分(感知領域)は完全に液中に浸っている必要があります。電極先端が完全に浸っていない場合、不安定な読み取り値が出ることがあります。電極先端が完全に浸るように、頂側(アピカル)と底側(バソラテラル)の液量を選択してください。インサートメーカーの推奨量よりも多い頂側と底側の液量を使用する必要があります。例えば、Corning-24ウェルトランスウェル(例:Corning 3470)では、上部(アピカル)に最低300 µL、下部(バソラテラル)に850 µLを推奨します。[これらの液量はSTX4電極の最低必要量よりやや多めです。] 手順は以下の通りです:1. STX4電極高さの調整。前面リングを時計回りに回して、電極がウェル内に最大深さまで入るようにします。2. STX4電極先端と液量の要件。測定中、両ブレードの電極感知先端(赤枠部分)が細胞培養液やバッファーなどの導電性液体に完全に浸っていることを確認してください。安定した読み取り値を得るために十分な頂側と底側の液量が必要です。STX4は吊り下げ状態のため、電極感知領域が完全に浸るように液量を増やす必要があります。 注意:インサートメーカーが推奨する液量よりも多く使用する必要があります。インサートメーカーの推奨液量では電極先端が完全に液中に浸らない場合があります。 [As mentioned as an example previously, for Corning-24 well Transwell (e.g., Corning 3470) we recommend using minimum 300 µL on top (apical) and 850 µL on bottom (basolateral). These volumes are a little more than the least required for STX4 electrode. You can check visually to make sure the apical and basolateral volumes are adequate to keep the electrode tips fully immersed, and then consistently use those volumes.]

サンプル液の量を増やしたり変更したりすると、抵抗値は変わりますか?

生の抵抗値の変化が見られることが予想されます。ただし、空白値(細胞のない空のトランスウェル)をサンプル値(細胞のあるトランスウェル)から差し引きます。こうすることで、増加した体積による空白値を増加した体積のサンプルから差し引くことになります。したがって、体積の増加によって生じる抵抗の変化は除外されます。実験内のすべてのサンプルで同じ体積を一貫して使用してください。

電極の洗浄やメンテナンスの手順はありますか?

以下はSTX4の洗浄またはメンテナンスに従うことができる手順です。洗浄やメンテナンスの際は、赤い枠で囲まれた領域まで少なくとも十分な液量を使用してください。 1. 滅菌DI水またはバッファーで洗い流します。 2. 任意のステップ:70%エタノールまたはイソプロパノールに素早く浸し、その後すぐにDI水またはバッファーに素早く浸します。 3. 電極を測定に使用します。 4. 測定サンプル間の任意のステップ:70%エタノールまたはイソプロパノールに素早く浸し、その後すぐにDI水またはバッファーに素早く浸します。 5. 測定後、電極の先端を70%イソプロパノールまたはエタノールに5~10分間浸します。 6. DI水で洗い流します。自然乾燥させます。電極は乾燥した状態で、光の当たらないまたは光の少ない場所に保管してください。 7. 頻繁に使用する場合は、毎週電極の先端を1%ターガザイムに15分間浸します。その後、DI水で洗い流します。 8. 測定に使用します。

なぜ私の測定値が変動しているように見えるのですか*?

*ドリフト–時間の経過とともに(電圧または抵抗のいずれかが)継続的に大幅に増加または減少する読み取り値のこと。例:1000 Ωで、読み取り値が毎分100 Ωずつ増加している。(毎分10 Ωのドリフトは許容範囲です。)過度のドリフトはpHや温度の変化、または電極の清掃が必要な場合に起こることがあります。 このドリフトの原因となりうる要因はいくつかあります。 電極が培養液に完全に浸かっていることを確認し、プレート内の液体温度が室温で平衡化されているか、プレートウォーマーを使用して一定であることを確認してください。-もう一つの一般的なドリフトの原因は、電極の先端に培養液の成分が付着していることです。電極(先端)は使用頻度に応じて週に1回まで、酵素洗浄剤(ターガザイムまたはエンゾール)で定期的に洗浄する必要があります。 ハンドヘルド電極は測定中できるだけ動かさないようにしてください。 過度の動きは測定値の変動を引き起こします。 さらに、5% CO2環境ではCO2の損失により培養液のpHが変化し、抵抗値の読み取りが変わることがあります。これは主に数分ではなく数時間にわたる連続測定の文脈で適用されます。

なぜ私の電極の測定値は不安定なのでしょうか*?

*不安定性–500 Ωの範囲では、測定値が450から550 Ωに跳ね上がり、安定しません(500 Ω範囲で±5 Ωの不安定性は許容範囲です)。より高い範囲では、100K Ω範囲で±1000 Ωまでが許容されます。不安定性を示す電極は酵素洗浄が必要な場合があります。 読み取りの不安定性の最も一般的な原因は、チップを溶液に完全に浸すか、酵素洗浄を行うことで解決できます。 電極チップが十分な導電性液体(培地またはバッファー)に完全に浸っていません。液面を電極チップの高さまで追加してください。(一貫した比較のために、頂端側と基底側の液量を一定に保ってください。)電極チップ(感知領域)に細胞培養培地の成分が付着している場合があり、これは酵素洗浄で解消できます。

EVOMTMマニュアルシステムが正常に動作しているかどうかは、どうやって確認すればいいですか?

1000オームのテスト抵抗器を使用して、EVOMメーター自体のテストと校正を行います。画面表示が1000オーム±1オームの読み取り値を示していることを確認してください。校正の詳細についてはユーザーマニュアルを参照してください。マニュアルのPDF版は、当社ウェブサイトの「サポート」タブ内の「マニュアル」ラベルの下にあります。 電極の機能をテストするには、KCl抵抗テストを使用します。脱イオン(DI)水を使って40mM、80mM、160mMのKCl濃度を準備してください。KCl溶液の濃度が倍になると、抵抗値は約半分に減少するはずです。 80mMおよび160mMのKCl溶液で抵抗値が変動する場合は、以下を確認してください。 測定中に電極の先端部分または感知領域が導電性液体(培地またはバッファー)に完全に浸っていること。 電極の清掃が必要です。電極の定期的な清掃・メンテナンスは強く推奨されており、電極の機能寿命を保つために必要です。

エンドーム

ENDOHMの不安定な抵抗値のトラブルシューティング

よくある質問(FAQ)の一つに、EndOhmを使ったTEER測定に関するものがあります。ENDOHMの抵抗値が安定しない場合は、トラブルシューティングが必要かもしれません。 EVOM2のテスト: まず、EVOM2メーターをテストしてください。この目的には1000Ωのテスト抵抗器(WPI # 91750)を使用できます。 テスト抵抗器の端にあるRJ-11プラグをメーターの入力ポートに差し込みます。 機能スイッチをオーム(Ω)に設定します。 EVOM2を充電器から外し、電源を入れます(I)。メーターは1000Ωを表示するはずです。表示されない場合は、小さなマイナスドライバーでR ADJネジを調整し、メーターが1000Ωを示すようにします。EVOM2が1000 ± 2-3オームを読み取り、その値が安定している場合は、EVOM2は正常に動作しています。 ENDOHMのテスト: 次に、ENDOHMをテストします。ENDOHMは異なるKCl濃度にさらすことで定性的にテストできます。濃度が高いほど安定した低いTEER値を示し、濃度が低いほど高いがやや不安定な値を示すはずです。 一般的に、TEER値が下がっている場合は、電流が培地だけを通るよりも低抵抗の別の経路を見つけているか、試料が何らかの電荷を帯びていることを意味します。問題がENDOHMにある場合、通常は電極表面の下に培地が漏れており、Ag/AgClディスクのワイヤーボンドを侵食していることが原因です。遅延反応として、接着剤の密封性が失われた非常に細かい亀裂に培地が浸透するのに時間がかかることがあります。TEER値が予想値を大幅に下回って継続的に低下する場合、ENDOHMは電極ボンドの漏れや電流・電圧経路のどこかで腐食が起きている可能性が高いです。 ENDOHMに細かい亀裂ができている場合は、交換が必要です。

EVOM3

EVOM3はEndohmと一緒に使えますか?

はい、ただし99672アダプターまたは新しいEVOM3ケーブル99916が必要です。

なぜ空白機能を使いたいのですか?

ブランク機能は、電極や液体の抵抗など、膜以外の測定値を差し引きたい場合に使用します。

EVOM3システムはTEERを自動的に計算しますか?

いいえ、TEERの測定には面積の計算が必要です。TEERを計算するには、測定された抵抗値に適切な表面積(以下)を掛けます。例えば、12 mmのインサートで565 Ωを測定した場合、TEERは565 Ω × 1.13 cm2 = 638.5 Ω・cm2となります。以下は、一般的に使用されるさまざまなトランスウェル/インサート形式に対応する表面積です:6ウェルプレート(24 mmインサート)4.52 cm2、12ウェルプレート(12 mmインサート)1.13 cm2、24ウェルプレート(6.5 mmインサート)0.33 cm2、96ウェルプレート(4.3 mmインサート)0.14 cm2

EVOM3のデータは、最後のウェルに到達すると自動的に保存されます。96個のウェルのうち8個だけ測定したい場合、どのようにデータを保存すればよいですか?

設定を開き、ストアメニューから「新しいプレート」を押すことで、メモリ内のデータをすべてクリアできます。これにより、以前の測定データが消去されます。メイン画面に戻り、プレビュー画面を開いて、測定するウェルを選択します(選択したウェルは緑色に変わります)。電極を設置し、測定を行います。選択したウェルの測定が完了したら、設定を開き、ストア画面メニューを押してから「新規保存」を押し、プレートデータをUSBドライブに保存してください。

EVOM3と電極をラミナーフード内で長時間UV光にさらす場合、どのように保管すればよいですか?

使用後はEVOM3をラミナーフードから取り出してください。次回使用時には、フード内のUVライトを点灯させます。UVでフードが消毒されたら、UVライトを消し、次に70~100%のエタノールまたはイソプロパノールをペーパータオルにスプレーしてEVOM3を拭いてください。アルコールをEVOM3に直接スプレーしないでください。

なぜ、サンプル内にSTX2-PLUS電極を入れているのに、EVOM3の読み取り値がダッシュ(—)になるのでしょうか?

電極が空気中にあるか、液体に部分的に浸かっている場合、不安定な読み取り値を記録するため、ダッシュが表示されることがあります。電極の先端部分(感知領域)は完全に液体に浸かっている必要があります。電極の先端が完全に浸かっていない場合も、不安定な読み取り値が見られることがあります。電極の先端が完全に浸かるように、頂側(アピカル)と底側(バソラテラル)の液量を選択してください。インサートメーカーが推奨する量よりも多い頂側と底側の液量を使用する必要があります。例えば、Corning-24ウェルトランスウェル(例:Corning 3470)では、上部(アピカル)に最低300 µL、下部(バソラテラル)に850 µLを推奨します。[これらの液量はSTX2-PLUS電極に必要な最小量よりやや多めです。] 手順は以下の通りです: 1: STX2-PLUS 電極高さの調整。前面リングを時計回りに回して、電極がウェル内に最大深さまで入るようにします。 2: STX2-PLUS 電極先端と液量の要件。測定中、両ブレードの電極感知先端(赤枠部分)が細胞培養培地やバッファーなどの導電性液体に完全に浸かっていることを確認してください。安定した読み取り値を得るために、十分な頂側と底側の液量が必要です。STX2-PLUSは吊り下げられた状態で使用されるため、電極感知領域が完全に浸かるように液量を増やす必要があります。注意:インサートメーカーの推奨液量より多くの液量を使用しなければなりません。インサートメーカーの推奨液量では電極先端が完全に浸かりません。 [前述の例のように、Corning-24ウェルトランスウェル(例:Corning 3470)では、上部(アピカル)に最低300 µL、下部(バソラテラル)に850 µLを推奨します。これらの液量はSTX2-PLUS電極に必要な最小量よりやや多めです。頂側と底側の液量が電極先端を完全に浸すのに十分かどうかを目視で確認し、その液量を一貫して使用してください。] 不安定な読み取りやダッシュの問題が続く場合、電極はおそらく塩素処理が必要です。塩素処理とは、電極先端を3~6%次亜塩素酸ナトリウム(漂白剤)に10~15分浸し、その後蒸留水で洗浄することを指します。これはSTX2-PLUSのメンテナンスの一部であり、重要なメンテナンス工程です。以下のメンテナンス手順(ステップ1)を参照してください。** 以下はSTX2-PLUSの洗浄またはメンテナンスに従う手順です。 1. 使用前に、電極先端を3~6%次亜塩素酸ナトリウム(漂白剤)に10~15分浸して塩素処理を行います。頻繁に使用する場合は3日に1回、または1週間以上保管した後に塩素処理を行う必要があります。** 2. 無菌の蒸留水またはバッファーで洗浄します。 3. 任意のステップ:70%エタノールまたはイソプロパノールに素早く浸し、その後すぐに蒸留水またはバッファーに浸します。 4. 測定に電極を使用します。 5. 測定間の任意のステップ:70%エタノールまたはイソプロパノールに素早く浸し、その後すぐに蒸留水またはバッファーに浸します。 6. 測定後、電極先端を70%イソプロパノールまたはエタノールに5~10分浸します。 7. 蒸留水で洗浄し、自然乾燥させます。電極は乾燥した状態で、光の当たらないまたは光が最小限の場所に保管してください。 8. 頻繁に使用する場合は、毎週電極先端を1%ターガザイムに15分浸します。その後、蒸留水で洗浄します。 9. 次に、電極先端を3~6%次亜塩素酸ナトリウム(漂白剤)に10~15分浸して塩素処理を行います。(ステップ1と同様) 10. 無菌の蒸留水またはバッファーで洗浄します。 11. 測定に使用します。 12. ステップ5から繰り返します。

サンプル液の量を増やしたり変更したりすると、抵抗値は変わりますか?

生の抵抗値の変化が見られることが予想されます。ただし、空白値(細胞のない空のトランスウェル)をサンプル値(細胞のあるトランスウェル)から差し引きます。こうすることで、増加した体積による空白値を増加した体積のサンプルから差し引くことになります。したがって、体積の増加によって生じる抵抗の変化は除外されます。実験内のすべてのサンプルで同じ体積を一貫して使用してください。

電極の洗浄やメンテナンスの手順はありますか?

以下はSTX2-PLUSの洗浄またはメンテナンスの手順です。洗浄やメンテナンスの際は、赤枠の範囲まで液体の量を十分に確保してください。 1. 使用前に、電極の先端を3~6%の次亜塩素酸ナトリウム(漂白剤)に10~15分間浸して塩素処理を行います。電極を頻繁に使用する場合は3日に一度、または1週間以上保管した後に塩素処理を行う必要があります。 2. 滅菌済みのDI水またはバッファーで洗い流します。 3. 任意のステップ:70%エタノールまたはイソプロパノールに素早く浸し、その後すぐにDI水またはバッファーに素早く浸します。 4. 電極を測定に使用します。 5. 測定の合間の任意のステップ:70%エタノールまたはイソプロパノールに素早く浸し、その後すぐにDI水またはバッファーに素早く浸します。 6. 測定後、電極の先端を70%イソプロパノールまたはエタノールに5~10分間浸します。 7. DI水で洗い流し、自然乾燥させます。電極は乾燥した状態で、光の当たらないまたは光が最小限の場所に保管してください。 8. 頻繁に使用する場合は、毎週1%のターガザイムに15分間電極の先端を浸します。その後、DI水で洗い流します。 9. 次に、電極の先端を3~6%の次亜塩素酸ナトリウム(漂白剤)に10~15分間浸して塩素処理を行います。(ステップ1と同様です。) 10. 滅菌済みのDI水またはバッファーで洗い流します。 11. 測定に使用します。 12. ステップ5から繰り返します。

WPIが推奨する他の電極取り扱い指示はありますか?

1. 電極をケーブル部分で持たないでください。内部の接続が徐々に物理的に破損する可能性があります。 2. 電極は矢印で示された部分(プラスチック)を持ってください。 3. 液体の浸漬や噴霧はここまでのレベル(最大)に制限してください。液体が内部のケーブルやコネクターに入り込むのを防ぐためです。電極の残りの部分は、イソプロパノールまたはエタノールをスプレーしたペーパータオルで拭いてください(直接スプレーしないでください)。

KWIK-SIL/KWIK-CAST

私はラットの「イメージング」実験でKwikSil外科用接着剤を使いたいと考えています。気泡を完全に取り除くか、少なくともできるだけ減らすにはどうすればよいですか?

気泡は硬化プロセスの副産物として発生する水素ガスです。硬化は非常に短時間で起こるため、ガスが逃げることができません。硬化時間を遅くすることで改善する場合があります。硬化プロセスを遅らせるには、混合前に材料を冷やしてください。

接着剤は硬化後、使用後にげっ歯類の毛から安全に取り除くことができますか?

もしKwik-Cast/Silがげっ歯類の毛に付着した場合、硬化した接着剤は毛から取り除くことができます。硬化した接着剤を毛から優しくゆっくりと引き離してください。もちろん、毛や髪には油分が付いています。

金属マイクロ電極

どの長さが必要ですか?

電極システムの全長は、主に記録または刺激したい組織の深さと使用するマイクロドライブシステムによって決まります。タングステンマイクロプローブは76 mmまたは125 mmの長さで提供され(WPIのウェブサイトでは125 μmは見当たりません)、5インチ未満の任意の長さでカスタム注文も可能です。プラチナ/イリジウムは通常2インチの長さで、ステンレススチールは51 mmの長さですが、どちらも短い長さやステンレススチールとポリイミドチューブを使用した長い長さで指定できます。純イリジウムは非常に高価なため、常にステンレススチールとポリイミドチューブに取り付けられており、通常は50 mmの長さです。

断熱材の厚さはどのくらいですか?

3インチのエクストラファインFプロファイルのタングステンマイクロプローブを除くすべての電極は、1ミクロンのパリレン-C絶縁コートが施されていますが、3ミクロンのパリレン-Cを持っています。この厚さが、当社が提供するほとんどすべての電極先端プロファイルに最適であることが証明されています。3ミクロンを選んだ理由は、神経要素に近づくために十分に小さい先端プロファイルを提供し、電極の挿入を容易にし、高インピーダンス電極の信号減衰を最小限に抑えるためです。高インピーダンスのマイクロプローブで深部構造を記録する際、容量性シャントによる信号の減衰が発生することがあるため、追加の絶縁がWPIのKTポリイミドマイクロプローブの形で必要になる場合があります。3インチタングステン電極のエクストラファインプロファイル(例:TM31C10)は、非常に細いマイクロプローブ先端を提供し、小さく密集した細胞構造からの記録に優れています。

必要なチップのインピーダンスや露出量はどのくらいですか?

当社独自の製造プロセスとパリレン-Cの特殊な特性により、任意のマイクロプローブを顕微鏡レベルの精度と再現性で露出させることが可能です。各マイクロプローブは高倍率顕微鏡下で個別に露出され、検査および電気的特性評価が行われます。当社のマイクロプローブは、同じ先端露出量の他の市販電極に比べてインピーダンス値が低くなっています。そのため、当社の電極を初めてご使用になる方は、用途に最適なインピーダンス値を選択できるよう、インピーダンスの範囲を指定されることをお勧めします。また、30年以上にわたり研究者にマイクロプローブを提供してきた経験から、実験パラダイムに最適な電極設計の選択について専門的なアドバイスも可能です。ご連絡の際には、研究者のご要望に関する情報をお知らせください。マイクロプローブのいかなる箱に対しても、インピーダンス範囲の指定に追加料金はかかりません。

私の用途に最適なチッププロファイルは何ですか?

研究に特化した電極プロファイルを好む方のために、さまざまなチップの選択肢をご用意しています。チップの選択は電極の性能に微妙ながら重要な変化をもたらすことがあり、以下に説明しています。初めてご使用になる方は、記録や刺激のプロトコルに最適なチッププロファイルを見つけるために、異なるチッププロファイルを試してみることをお勧めします。 A-スタンダード 当社の標準チッププロファイルは、鋭くも頑丈な先端を特徴としており、汎用性の高い性能と貫通性と耐久性の効果的なバランスを提供します。最も広く使われているチッププロファイルであり、ほとんどの神経記録用途に標準チップを推奨していますが、多くの刺激プロトコルにも効果的です。アーク露出法を採用しており、正確で一貫した性能と非常に広範囲のインピーダンスを実現しています。この方法では電極ごとにインピーダンスにわずかなばらつきが生じますが、多くの研究者はこれを許容範囲と考えています。より正確なチップ露出が必要な場合は、少額の追加料金でレーザー露出サービスも提供しています。ご希望の方はお問い合わせください。 B-鈍化チップ 鈍化チップは、より丸みを帯びた弾丸型の先端に設計されています。多くの用途で、鈍化チップは優れた刺激性能を発揮し、その短いプロファイルにより電極が点源として機能し、絶縁性が向上します。多くの研究者は、このプロファイルが従来の鋭いチップよりも選択性が高く、高強度刺激プロトコルにより適していると感じています。また、鈍化チップの使用により細胞の穿刺が減少するという報告もあります。 F-超極細 超極細チッププロファイルは、著しく鋭いテーパーと薄い絶縁層を特徴としています。このタイプの電極は、視覚野や聴覚野の条線層のような、小さく密集した細胞集団から記録する必要がある浅い準備に一般的に使用されます。非常に繊細なため、タングステン電極のみで、長さ3インチ(76mm)、シャフト径は0.003インチ(75ミクロン)と0.005インチ(125ミクロン)の両方で提供しています。4mmを超える貫通でチップインピーダンスが1.5MΩを超える場合は、容量性ショートを減らし電極の剛性を高めるために、追加のポリイミドチューブ層を指定することを推奨します。 H-熱処理済み 熱処理済み電極は、大型哺乳類の硬膜のような硬い膜を貫通する必要がある研究者向けです。顕微鏡下で電極先端近くに熱源を加えることで、標準プロファイルよりも緩やかなテーパーの先端を持ち、先端近くのポリマー絶縁を強化した電極を提供できます。これにより、硬い膜をより容易に、かつ先端や絶縁の損傷リスクを減らして貫通できます。

金属マイクロ電極のインピーダンス測定に問題がありますか?

1. インピーダンステスターを確認してください。測定している周波数が1キロヘルツと異なっている可能性があります。 2. インピーダンステスターにサンプル&ホールド回路がないか確認してください。その場合、テストボタンを押した直後にインピーダンスが測定され、インピーダンスが安定する時間がありません。 3. 通常、電極が生理食塩水に浸かって数分後にインピーダンスは低下します。 4. 時には電極が酸化してインピーダンスが上がることがあります。その場合は、生理食塩水中の電極に約マイナス3〜4.5ボルトの電圧をかけて電極を洗浄し、脱酸化することをお勧めします。

どの電極配置が必要ですか?

現在、当社では3種類の異なる電極構成を提供していますが、過去には多くのカスタムデザインも製作してきました。製品セクションにあるプローブの型番をご覧いただくと、WE30031.0A5のような型番が付いていることがわかります。型番の「00」の部分がマイクロプローブの構成を示しています。 モノポーラー電極 - 00 特別な取り付けがなく、先端がパリレン-Cで絶縁されたシャープなプローブで、長さ、幅、先端形状、インピーダンスは電極注文用の表に記載された仕様に従います。 ポリイミドチューブ - PT 剛性を高め、絶縁厚を追加するためにポリイミドチューブに取り付けられた電極です。この取り付けは、比較的高インピーダンスの電極が脳や脊髄の深い層に貫入する必要がある場合に推奨されます。 ST 当社のバイポーラーまたはステレオトロードを示します。インピーダンスが0.5メガオーム未満で注文されたこれらの電極は、刺激電流場の局所化に優れています。高インピーダンスのステレオトロードは、2つの近接したマイクロ電極で複数のユニットを同時に記録することで単一神経要素の分離を強化するのに優れています。先端間隔は通常、ステレオトロードを作成する際に使用される電極のシャフト直径と同じです。異なる先端間隔もご要望に応じて対応可能です。

当社の電極にはどのタイプのコネクターが使用されていますか?

5482および5483ピンコネクターは、当社の電極の遠位端に取り付けられています。これらのコネクターおよび対応するコネクターM202は、こちらをクリックしてアクセサリーページからご購入いただけます。多くのユーザーはコネクターなしで電極を使用することを好みますが、それでも問題ありません。ご希望があれば、コネクターを取り外してお渡しします。ただし、コネクターは製造工程の初期段階で取り付けられているため、取り外しによる割引はございません。

異なる電極インピーダンス値に対するチップの露出量はどのようになりますか?

ヒートテーパード「H」チッププロファイルのチップ露出は、約15〜20パーセント多くなります。 ブラント「B」チッププロファイルのチップ露出は、約15〜20パーセント少なくなります。 エクストラファイン「F」チッププロファイルのチップ露出は、約10〜15パーセント多くなります。

金属マイクロ電極のインピーダンス測定に問題がありますか?

1. インピーダンステスターを確認してください。測定している周波数が1キロヘルツと異なっている可能性があります。 2. インピーダンステスターにサンプル&ホールド回路がないか確認してください。その場合、テストボタンを押した直後にインピーダンスが測定され、インピーダンスが安定する時間がありません。 3. 通常、電極が生理食塩水に浸かって数分後にインピーダンスは低下します。 4. 時には電極が酸化してインピーダンスが上がることがあります。その場合は、生理食塩水中の電極に約マイナス3〜4.5ボルトの電圧をかけて電極を洗浄し、脱酸化することをお勧めします。

NANOLITER2020

オイル充填型ガラスマイクロピペットを使う利点は何ですか?

「バックフィリング」とは、ピペットの大きく引き伸ばされていない端から液体を充填する工程を指します。「フロントフィリング」は、ピペットの小さく引き伸ばされた先端からマイクロピペットに液体を充填することを表す用語です。ガラス製マイクロピペットはまずミネラルオイルで完全にバックフィルされ、NANOLITERインジェクターヘッドに固定されます。その後、先端からミネラルオイルが少量吐出されます。これにより空間が作られ、先端からサンプルをフロントフィルするための圧力が生まれます。フロントフィリングは、バックフィリング時に発生しがちな高価または希少なサンプルのこぼれや損失を防ぎます。サンプル量が少ない場合は、まずオイルでガラスマイクロピペットをバックフィルし、その後サンプルをフロントフィルする方法が唯一の選択肢となることがあります。

WPIの旧標準コントローラーで300704インジェクターヘッドを動かすことはできますか?

WPI NANOLITER2020 インジェクターヘッド(300704)には、MICRO2T コントローラー(推奨)が必要です。WPI の MICRO4 コントローラーを使用してポンプを制御することも可能です。300704 インジェクターヘッドは、WPI の旧標準コントローラーでは使用できません。

UMP3ポンプで使っているのと同じMICRO2Tコントローラーを使えますか?既存のMICRO2Tコントローラーで300704ポンプを使うには、追加のアダプターが必要ですか?

はい、同じMICRO2TコントローラーでUMP3ポンプとNanoliter2010の両方を制御できます。追加のアダプターは必要ありません。300704はMICRO2Tコントローラーに直接接続します。

フットスイッチでポンプを操作できますか?

はい、フットスイッチ13142を使用できます。これはNANOLITER2020システムには含まれておらず、別売りです。

ガラスマイクロピペットが取り付け後に外れてしまったり、サンプルの前充填ができない場合はどうすればよいですか?

無臭で無色の鉱油がガラスマイクロピペットの充填に使用されます。ガラスマイクロピペットが設置され、複数回の使用で徐々に油がこぼれると、ガスケットが滑りやすくなり、ガラスマイクロピペットを固定できなくなります。インジェクターヘッド内の油のこぼれ、ガラスマイクロピペットの外側、およびガスケットの清掃にはKimwipesを使用してください。必要に応じて、新しいガスケットセットを取り付けて問題を解決してください。

動画に従ってOリングを正しい順序と向きで配置しましたが、それでも気密シールができません。どうすればよいでしょうか?

リアシールが緩んでいるか逆に取り付けられていると、空気の通り道から漏れることがあります。このガスケットはプランジャーワイヤーにしっかりと密着している必要があります。ピペットが引っ張りテストされると、中間のガスケットから簡単に外れて空気の注入によって漏れる可能性があります。ガラスの端部は滑らかで(ガラスにひび割れがないこと)、コレットを締める際に中間のシートにしっかりと押さえられている必要があります。そのプラスチック製のシートはわずかに変形し、ガラスの端に「成形」されます。良好なシールがあっても、流体は追加の逆圧なしに自然に流れ出ることがありますが、10μmのチップでの混合量は非常に少ないです。どちらかのリアガスケットが空気の流れを許すと、漏れが発生します。