Elettrodo STX4 EVOM™ con lame rimovibili per la misurazione della TEER in inserti da 6.5 mm

Caratteristiche

• Le lame dell’elettrodo sono sostituibili. Dopo mesi o anni di utilizzo, se sugli elettrodi si sono formati depositi dovuti ai terreni di coltura o ai campioni e le letture iniziano a essere instabili, è possibile sostituire le lame senza dover cambiare l’intero elettrodo.

  NOTA: la pulizia regolare o quotidiana dopo l’uso prolunga la vita utile delle lame dell’elettrodo.

• La punta dell’elettrodo è dotata di un rivestimento speciale e non necessita di clorurazione con candeggina o ipoclorito di sodio per funzionare correttamente; inoltre, la clorurazione non la danneggia. La clorurazione era fondamentale per mantenere la funzionalità del modello precedente (elettrodi STX2-PLUS).

Le punte dell’elettrodo STX4, ovvero la regione di rilevamento, hanno un rivestimento speciale che non richiede clorurazione.

• La punta dell’elettrodo STX4 (area di rilevamento attiva) è più corta di quella dell’STX2-PLUS. Grazie al rivestimento speciale, non deve essere grande quanto quella dell’STX2-PLUS. Pertanto, per mantenere le punte completamente immerse e ottenere letture TEER stabili, l’elettrodo STX4 richiede volumi inferiori di liquido apicale (parte superiore dell’inserto) e basolaterale (terreno di coltura) rispetto all’STX2-PLUS.

• L’elettrodo STX4 si adatta perfettamente agli inserti per colture cellulari Transwell sospesi a 24 pozzetti (ad es. Corning 3470) e può rimanere appoggiato sopra di essi. Ciò consente di lavorare a mani libere, migliorando ulteriormente la precisione di misurazione.

• L’elettrodo STX4 offre una maggiore precisione di misurazione grazie al suo design, simile a quello dell’STX2-PLUS, che elimina o riduce al minimo le variazioni dovute al posizionamento dell’elettrodo riscontrate con STX2 o STX3. L’elettrodo STX2 e quello STX3 sono portatili e il loro design flessibile li rende soggetti a inclinarsi, modificando la distanza tra le due lame durante la misurazione. Con STX2 o STX3 è difficile ottenere un valore stabile e uniforme all’interno dello stesso gruppo di campioni. In genere, gli utenti di STX2 o STX3 effettuano più misurazioni dello stesso campione e ne calcolano la media. Con l’elettrodo STX4 non è necessario misurare più volte lo stesso campione.

• L’elettrodo STX4 è dotato di un cavo schermato e anche il corpo metallico dell’elettrodo è collegato al sistema di schermatura. Riducendo al minimo o eliminando le interferenze elettriche e dei telefoni cellulari, la schermatura garantisce misurazioni TEER stabili (senza fluttuazioni) e non influenzate dalle interferenze.

Vantaggi

• Lame sostituibili – Questo nuovo elettrodo STX4 è dotato di lame sostituibili.

• Non è necessario clorurare l’elettrodo – Le punte dell’elettrodo sono rivestite appositamente e non richiedono la clorurazione (fase di manutenzione) per garantire il corretto funzionamento dell’elettrodo durante la misurazione della TEER di strati cellulari come le colture epiteliali. La clorurazione era necessaria per STX2-PLUS.

• Richiede un volume di liquido inferiore – Per mantenere le punte immerse e ottenere letture stabili, questo elettrodo richiede un volume di liquido inferiore rispetto all’elettrodo STX2-PLUS.

• Uso a mani libere – L’elettrodo STX4 si adatta perfettamente alle piastre per colture cellulari con transwell sospesi a 24 pozzetti e può rimanere appeso sopra questi transwell, consentendo l’uso a mani libere.

• Maggiore precisione – L’elettrodo STX4 offre una maggiore precisione nelle misurazioni TEER perché elimina i fattori di variabilità dovuti alle variazioni della distanza e del posizionamento degli elettrodi, riscontrabili con l’elettrodo STX2.

• Schermato dalle interferenze a radiofrequenza (RFI) – Questo elettrodo STX4 è dotato di un cavo schermato che elimina o riduce al minimo qualsiasi interferenza (proveniente da fonti elettriche o telefoni cellulari) che influisca sulle letture delle misurazioni TEER.

L’elettrodo STX4 si appoggia sul pozzetto per consentire l’uso a mani libere; l’anello di regolazione permette di posizionare le lame dell’elettrodo nel punto esatto del pozzetto in cui devono trovarsi, sospese nella soluzione senza toccare la membrana o il fondo del pozzetto della piastra per colture cellulari.

NOTA: migliora la precisione delle misurazioni TEER con il tuo EVOM2 meno recente sostituendo STX2 o STX3 con il nuovo STX4. STX4 può essere utilizzato con EVOM2 (modello precedente) utilizzando l’adattatore EVM-AC-02-01-01, venduto separatamente.

Principali miglioramenti di STX4 rispetto a STX2-PLUS

• Risparmia risorse: STX4 richiede volumi di liquido inferiori.

• Risparmia tempo: STX4 richiede meno manutenzione. Non è necessario clorurare l’elettrodo.

• A lungo termine, STX4 è più conveniente perché le lame dell’elettrodo possono essere sostituite dall’utente.

 

Per i dettagli, consulta la tabella seguente (differenze e somiglianze tra STX4 e STX2-PLUS)

Tipo	STX2-Plus	STX4
Volumi di liquido necessari per misurazioni stabili	Con l'STX2-PLUS è necessario un volume maggiore di liquido (terreno) per campione, affinché le regioni di rilevamento più lunghe siano completamente immerse e si ottengano misurazioni stabili. Volumi di esempio: per la piastra transwell Corning 3470 a 24 pozzetti, per l'STX2-PLUS sono necessari almeno 300 µL di terreno nella parte superiore (apicale) e 850 µL nella parte inferiore (basolaterale).	Per ottenere misurazioni stabili e accurate con l'STX4, è necessario un volume minore di liquido (terreno) per campione. Poiché le regioni di rilevamento dell'STX4 sono più corte e rivestite appositamente, l'STX4 richiede volumi di liquido inferiori rispetto all'STX2-PLUS. L'uso di una quantità minore di terreno con l'STX4 fa risparmiare risorse. Volumi di esempio: per la piastra transwell Corning 3470 a 24 pozzetti, per l'STX4 sono necessari almeno 150 µl di terreno apicale e 500 µl di terreno basolaterale.
Clorurazione (manutenzione da parte dell'utente) richiesta	Sì, è importante. Se utilizzato quotidianamente, l'elettrodo deve essere clorurato immergendone le punte in ipoclorito di sodio al 3-6% per 10 minuti (seguiti da un risciacquo con acqua deionizzata) per garantirne il corretto funzionamento.	No, non è necessario. Non occorre clorurare l'elettrodo. (La clorurazione non ne altera il funzionamento.) Uno speciale rivestimento delle regioni di rilevamento dell'elettrodo ne garantisce il corretto funzionamento. L'utente deve eseguire meno manutenzione, il che fa risparmiare tempo.
Lamelle sostituibili dall'utente (Queste lamelle entrano direttamente in contatto con i campioni e contengono la regione di rilevamento.)	No. Le lamelle non sono staccabili.	Sì. È possibile sostituire le lamelle, rendendo l'STX4 più conveniente nel lungo periodo.
Applicazione	• Ideale per piastre per colture cellulari transwell a 24 pozzetti. • Utilizzato per misurare la resistenza e i millivolt.	Come STX2-PLUS
Connessione diretta con EVOM Manual o con le versioni precedenti di EVOM3	Sì	Sì
Compatibilità con EVOM2, EVOM, Millicell ERS-2 e ERS (con l'adattatore EVM-AC-02-01-01)	Sì	Sì

 

 

Documenti

Manuale di istruzioni dell'elettrodo STX4 con lamelle sostituibili

Tabelle di compatibilità di inserti e piastre

Video

7 motivi per passare ai tuoi elettrodi EVOM: ecco il nuovo STX4

 

 

Come sostituire le lamelle dell'elettrodo STX4 per l'uso con EVOM3

 

Domande frequenti

Le punte delle lamelle dell'elettrodo STX4 tendono a scurirsi durante l'uso o durante la conservazione?

Sì, è un processo normale. Le punte dell'elettrodo STX4 tendono a scurirsi (è solo un effetto estetico), ma ciò non influisce sul funzionamento dell'elettrodo o della lama.

Il colore della punta della lama dell'elettrodo STX4 può essere notevolmente diverso sul lato esterno rispetto al lato interno?

Sì, è normale (è solo un effetto estetico) e può essere attribuito al percorso della corrente tra le due lame dell'elettrodo. In genere, il lato esterno delle punte delle lame tende a scurirsi maggiormente, poiché gli elettrodi esterni sono coinvolti nell'applicazione della corrente elettrica proveniente dall'EVOM (Fig. 29). Il lato interno delle punte delle lame tende a rimanere relativamente biancastro (colore della punta), poiché da quel lato non passa corrente elettrica. Gli elettrodi interni (il lato interno delle punte delle lame) rilevano le variazioni (di tensione) in risposta alla corrente applicata. Questa differenza o variazione di colore delle punte (tra il lato interno e quello esterno) non influisce sul funzionamento effettivo della lama o dell'elettrodo.   

L'annerimento della punta dell'elettrodo STX4 e una notevole differenza di colore tra il lato interno e quello esterno delle lame dell'elettrodo (durante la conservazione o dopo un periodo di utilizzo) sono da considerarsi normali.

NOTA: WPI esegue un trattamento speciale di ogni singola lama dell'elettrodo (in particolare delle punte) e verifica il corretto funzionamento di ogni lama prodotta e dell'elettrodo STX4.

Perché EVOM Manual mostra trattini o letture instabili anche se l'elettrodo STX4 è inserito nel campione?

Un elettrodo esposto all'aria o immerso solo parzialmente nel liquido può mostrare trattini, perché registra letture instabili. La parte della punta dell'elettrodo (zona di rilevamento) deve rimanere completamente immersa. Le letture possono essere instabili anche quando la punta dell'elettrodo non è completamente immersa. Assicurarsi di scegliere volumi apicali e basolaterali tali che le punte di entrambe le lame dell'elettrodo rimangano completamente immerse. 

Ruotare l'anello di regolazione della lunghezza in senso orario, in modo che le lame dell'elettrodo possano entrare più in profondità nel campione e le punte possano rimanere completamente immerse nei liquidi. 

La lunghezza esposta delle lame dell'elettrodo STX4 può essere regolata ruotando l'anello di regolazione.

Assicurarsi che le punte di rilevamento degli elettrodi su entrambe le lame rimangano completamente immerse in un liquido conduttivo (terreno di coltura cellulare o tampone) durante la misurazione. I volumi apicale e basolaterale devono essere adeguati per ottenere una lettura stabile.

È necessario pulire l’elettrodo ogni giorno?

Sì, è fondamentale pulire l’elettrodo dopo ogni utilizzo quotidiano, lasciarlo asciugare all’aria e conservarlo in un luogo asciutto. Questo è necessario per prolungare la durata delle lame dell’elettrodo. Per i dettagli, consulta la sezione MANUTENZIONE del manuale di istruzioni STX4.

WPI raccomanda altre istruzioni per maneggiare l’elettrodo?

1. Sollevare sempre l’elettrodo afferrandolo per il corpo, mai per il cavo. Si rischia di danneggiare gradualmente i collegamenti interni.

   	A. NON tenere l’elettrodo per il cavo. (Modo scorretto di maneggiarlo)
   	B. Tieni l’elettrodo per la parte in plastica indicata dalla freccia rossa. (Modo corretto di maneggiarlo)

2. Il livello di immersione o di spruzzo del liquido deve rimanere al di sotto del livello massimo indicato dalle frecce nell’immagine qui sotto. Il liquido non deve penetrare all’interno né raggiungere i cavi o i connettori. Puoi pulire il resto dell’elettrodo con un tovagliolo di carta imbevuto di isopropanolo o etanolo. (Non spruzzare direttamente.)

   L’immersione nel liquido deve arrivare al massimo fino a questa linea, misurando dalla punta. Il resto dell’elettrodo può essere pulito con un tovagliolo di carta umido.

I miei inserti o transwell sono compatibili con l’elettrodo STX4?

L’elettrodo STX4 funziona al meglio con i comuni inserti sospesi a 24 pozzetti (come quelli di Corning, Millipore e Greiner). Può essere utilizzato con la maggior parte degli altri inserti a 24 pozzetti e con quelli a 12 pozzetti. Con gli inserti a 12 pozzetti, durante la misurazione l’elettrodo deve essere tenuto in mano o sostenuto con la mano. L’elenco degli inserti compatibili è disponibile qui oppure nella sezione “APPENDICE B: INSERTI E PIASTRE COMPATIBILI” del manuale di istruzioni STX4.

L’aumento o la variazione del volume dei liquidi nei campioni può modificare i valori di resistenza?

Sì. È normale osservare una variazione dei valori di resistenza grezzi. Tuttavia, è necessario sottrarre i valori del bianco (⁠transwell senza cellule) dai valori dei campioni (transwell con cellule). In questo modo, si sottrae il valore del bianco con volume aumentato da quello dei campioni con volume aumentato. Si esclude così qualsiasi variazione della resistenza dovuta all’aumento del volume. In un esperimento, usa volumi uguali per tutti i campioni.

La resistenza elettrica e la resistenza elettrica transepiteliale (TEER) sono la stessa cosa?

No. Moltiplica la resistenza misurata per l’area superficiale appropriata della membrana per calcolare il TEER. Ad esempio, se un insert da 6.5 mm (piastra a 24 pozzetti) misura 565 Ω, il TEER è:

 565 Ω × 0.33 cm² = 186.45 Ω-cm²

[Per una piastra a 24 pozzetti (insert da 6.5 mm), l’area è pari a 0.33 cm² e per una piastra a 12 pozzetti (insert da 12 mm) l’area è pari a 1.13 cm². Consulta le specifiche tecniche del produttore per lo specifico insert/transwell (ad esempio, Millipore, Corning, ecc.) per trovare informazioni accurate sull’area della membrana applicabile a uno specifico codice prodotto dell’insert.] 

Puoi suggerire alcuni parametri sperimentali che si possono controllare per ottenere risultati TEER più costanti?

• È noto che la temperatura influisce sui valori TEER. Per ottenere valori costanti, consigliamo di mantenere costante la temperatura dei campioni. Suggeriamo di estrarre dall’incubatore la piastra per pozzetti con gli insert contenenti le cellule e di lasciarla stabilizzare a temperatura ambiente all’interno della cappa a flusso laminare per 15-20 minuti prima di effettuare le misurazioni. A quel punto, tutti i campioni avranno raggiunto all’incirca la stessa temperatura ambiente.

• Dopo aver aggiunto i liquidi ai transwell, attendi 15 minuti prima di effettuare le misurazioni. I livelli del liquido all’interno e all’esterno dell’insert tenderanno a raggiungere la stessa altezza e garantiranno una maggiore stabilità delle letture. 

• Consigliamo di usare lo stesso liquido conduttivo con la stessa concentrazione ionica sia sul lato apicale (parte superiore dell’insert per coltura cellulare) sia sul lato basolaterale (parte inferiore dell’insert). Ad esempio, usa lo stesso terreno di coltura sia all’interno sia all’esterno dell’insert. 

• L'applicazione di volumi costanti del fluido (terreno di coltura/tampone) durante tutti gli esperimenti riduce la variabilità.