Séquence d'injection MICRO-ePUMP expliquée
Présentation du MICRO-ePUMP
Conçu pour simplifier l'injection intracellulaire et diverses autres tâches de microinjection, le MICRO-ePUMP utilise une pression d'air soigneusement régulée pour injecter des cellules avec un fluide. Les volumes injectés varient de picolitres à nanolitres. Le temps, la pression d'injection et la pression de compensation sont ajustés indépendamment via l'interface à écran tactile. Les intervalles de temps peuvent aller de 2 secondes à 10 ms ou moins, selon le réglage de la pression d'injection. L'intervalle de pression d'injection est déclenché à l'aide de la pédale.
Le MICRO-ePUMP est conçu pour injecter de très petites quantités de fluides, tels que des médicaments, dans des cellules ou de petits organites. Deux pressions positives différentes peuvent être appliquées grâce à un circuit de temporisation précis qui commute automatiquement entre les deux pressions.
- Le port fournit une pression positive pour l'éjection à haute pression.
- Le port de pression maintient une faible pression positive de « compensation » à la pipette d'injection entre les impulsions d'injection pour empêcher l'aspiration de fluide par capillarité.
MICRO-ePORE intégré pour faciliter la pénétration
La technologie MICRO-ePORE™ Pinpoint Cell Penetrator de WPI est intégrée dans le MICRO-ePUMP. Lorsque le chercheur active le MICRO-ePORE™, il délivre un signal de tension très localisé sur un site d'injection ciblé pour faciliter la pénétration avec un traumatisme minimal. Le chercheur détermine l'amplitude et la fréquence du signal qui conviennent le mieux à l'application. Le signal provient de la boîte de contrôle et est transmis via le câble d'interface de l'électrode au porte-microélectrode. Un fil d'argent est utilisé pour transmettre le signal dans la substance électriquement conductrice injectée. Une électrode de référence est utilisée pour placer le milieu à un potentiel de 0,0 V par rapport à la tension générée.
Comprendre la séquence d'injection du MICRO-ePUMP
Voici une infographie pratique définissant la séquence des événements qui se produisent lors d'une injection avec le MICRO-ePUMP. Plusieurs événements se produisent presque simultanément. Cette infographie montre les différents points de déclenchement et illustre ce qui se passe à chaque étape clé. Les événements déclencheurs sont présentés chronologiquement en bas, et le graphique montre l'état de ces points d'intérêt pendant les événements :
- Le type de pression appliquée (pression de compensation ou pression d'injection)
- La position de la pédale (non pressée, à mi-course, complètement enfoncée)
- La position de la pipette (dans la solution tampon, à l'intérieur de la cellule)
- Les tonalités de retour sonore (aucun son, tonalités de réussite ou d'échec, tonalité d'injection)
- L'application de la tension (aucune tension appliquée, tension de mesure de continuité, tension d'injection)
Séquence des événements pour réaliser une injection
1. Pour réaliser une injection, vous placez d'abord la pipette dans la solution tampon. Ensuite, vous appuyez à mi-course sur la pédale jusqu'à la première position. La pédale initie le test de continuité du circuit, qui dure 400 ms. Pendant ces 400 ms :
- Le MICRO-ePUMP maintient la pression de compensation pour empêcher l'aspiration de fluide par capillarité.
- Aucun son n'est entendu pendant le test de continuité.
- Le courant monte à la tension de mesure de continuité puis redescend à la tension d'injection programmée après le test de 400 ms.
2. Immédiatement après la fin du test de continuité, l'un des deux tons est entendu.
- Un ton grave indique que la continuité du circuit n'a pas pu être établie, et vous devez réévaluer votre installation avant de poursuivre l'injection.
- Un ton aigu signale que la continuité du circuit est vérifiée, et vous pouvez continuer.
La tension descend à la tension d'injection programmée dès la fin du test. Le MICRO-ePORE est activé et prêt pour la pénétration cellulaire, selon les résultats du test de continuité.
3. Si le test de continuité est réussi, vous pouvez déplacer la pipette dans la cellule. Au point de pénétration :
- La pression de compensation est maintenue.
- La pédale est toujours à mi-course.
- Le ton du test de continuité est toujours audible.
- La tension d'injection est maintenue, ce qui signifie que le MICRO-ePORE est activé.
4. Dès que la pipette pénètre dans la cellule, vous pouvez enfoncer complètement la pédale (deuxième position). À ce moment :
- Le MICRO-ePUMP augmente à la pression d'injection et maintient cette pression pendant le temps d'injection programmé.
- Aucun son n'est entendu pendant l'injection.
- La tension du MICRO-ePORE tombe à zéro et y reste jusqu'au début du prochain cycle d'injection.
5. Lorsque l'injection est terminée :
- La pression du MICRO-ePUMP retombe à la pression de compensation.
- La pédale reste complètement enfoncée.
- La pipette reste dans l'échantillon.
- Un court ton distinct retentit pour indiquer que l'injection a été réalisée.
6. À ce moment, vous pouvez retirer la pipette de l'échantillon et tous les autres points d'intérêt restent inchangés.
7. Enfin, vous pouvez relâcher la pédale. Vous êtes maintenant prêt à répéter le cycle d'injection avec un nouvel échantillon.
Télécharger l'infographie
Le cycle d'injection se déroule en quelques secondes, mais l'infographie montre clairement comment tous les événements déclencheurs et points d'intérêt se combinent. Voir cela graphiquement peut vous aider à vous familiariser avec ce qui se passe lors de chaque étape de l'injection. Vous pouvez télécharger l'infographie prête à imprimer pour l'afficher dans votre laboratoire.
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