Quantification de l'ADN/ARN à l'aide du DIPUV-Mini et d'un spectromètre Tidas

Résumé

Les concentrations d'ADN en solution (31µg/mL et 688µg/mL) ont été mesurées avec un spectromètre et une source lumineuse UV/VIS dans un DIPUV-Mini. En raison de la longueur de trajet de 2 mm, l'utilisation d'un DIPUV-Mini ne nécessite pas de dilution préalable dans cette plage de concentration, éliminant ainsi une source potentielle d'erreur.

Procédure expérimentale

Des solutions standards d'ADN (Sigma D1626) ont été préparées gravimétriquement en utilisant de l'eau ultrapure 18,2 MΩ/cm comme solvant. Les solutions ont été préparées entre 0,0µg/mL et 687,6µg/mL.

Les mesures ont été prises en triplicata à l'aide d'un DIPUV-Mini. Le DIPUV-Mini était connecté à une source lumineuse UV/VIS (WPI #D4H).

Les données ont été collectées par incréments de 1 nm sur toute la plage de l'instrument (190 nm-720 nm). L'instrument a été configuré de manière à ce que les mesures de référence donnent une intensité totale de 80 %. Toutes les mesures ont utilisé de l'eau ultrapure 18,2 MΩ/cm comme solution de référence.

Résultats

Les résultats expérimentaux sont présentés dans le Tableau 1 :

Tableau 1 : Concentrations d'ADN et valeurs d'absorbance résultantes

Puisque l'absorbance en fonction de la concentration suit la loi de Beer-Lambert,

A= εlc
Les valeurs d'absorbance attendues ont été calculées à partir des concentrations de la solution d'ADN. Les valeurs de littérature de ε pour l'ADN double brin (dsDNA) sont listées comme 0,020µg/mL*cm.

Les données expérimentales sont présentées dans la Figure 1 avec les mesures d'absorbance calculées indiquées par une ligne pleine. Les mesures d'absorbance sont exprimées à une longueur d'onde de 260 nm. L'écart par rapport à la valeur théorique à des valeurs d'absorbance plus élevées est dû à une interférence de lumière parasite dans le spectromètre.

 Figure 1 : Absorbance mesurée versus théorique

Figure 2 : Mesure typique de l'ADN (281.6µg/mL)

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