Notions de base sur le microscope
Les microscopes sont un outil standard de laboratoire, mais choisir le bon microscope pour une application particulière peut être un défi. Tout d’abord, considérez comment vous allez utiliser l’instrument. Regardez-vous des lames, disséquez-vous un petit animal ou effectuez-vous une chirurgie ? (L’application détermine la distance de travail nécessaire et la puissance de grossissement.) Quel type de support utiliserez-vous ? (Support à potence, bras articulé ou support sur tige) Le microscope sera-t-il utilisé en milieu scolaire ? (Un microscope trinoculaire offre la possibilité d’inclure une caméra.) Aurez-vous besoin d’une caméra ? (Une caméra vous permet de projeter l’image du microscope sur un PC ou une télévision ou de prendre des images fixes.) Les réponses à ces questions vous aident à déterminer la distance de travail requise, le niveau de grossissement, le type de support de montage et le matériel nécessaire.
Parties d’un microscope
Oculaire – Deux lentilles ou plus sont contenues dans l’oculaire, et une variété d’oculaires peut être utilisée dans un microscope. Les grossissements typiques des oculaires sont 10X, 15X et 20X. L’oculaire possède généralement un réglage de dioptrie pour une mise au point plus nette. Pour des informations sur la distance interpupillaire et le réglage des dioptries, voir http://micro.magnet.fsu.edu/primer/java/kohler/diopter/index.html.
Objectifs – Les objectifs focalisent la lumière provenant de l’échantillon. Habituellement, trois à cinq objectifs sont vissés sur la tourelle porte-objectifs. Les objectifs existent en différentes puissances de grossissement et types. Pour plus de détails sur les types d’objectifs, voir « Objectifs de microscope ».
Platine – La platine est une plateforme qui supporte l’échantillon. Il y a généralement un trou au centre qui permet à la lumière de passer. L’échantillon est positionné au-dessus de ce trou.
Condenseur – Le condenseur est une lentille qui concentre la lumière de la source lumineuse sur l’échantillon.
Source lumineuse – Bien que la source lumineuse puisse être la lumière ambiante réfléchie par un miroir, il s’agit généralement d’une lampe halogène, d’une lumière LED ou d’un laser.
Boutons de mise au point – Utilisez les boutons de mise au point grossière et fine pour déplacer la platine vers le haut et vers le bas afin de faire la mise au point de l’échantillon dans les oculaires.
Définitions
Les termes suivants peuvent être utiles lors de la discussion sur les microscopes :
Champ de vision (FOV) – C’est le diamètre du cercle de lumière que vous voyez en regardant à travers les oculaires du microscope. Plus le grossissement est élevé, plus le champ de vision est petit.
CONSEIL TECHNIQUE : Le champ de vision peut être calculé sur la plupart des microscopes composés en utilisant le numéro de champ et le grossissement de l’objectif. Le FOV = numéro de champ / grossissement de l’objectif. Par exemple :
Numéro de champ 18 mm avec un objectif 10X --> 18/10=1,8 mm=1800 µm FOV.
Numéro de champ 20 mm avec un objectif 40X --> 20/40=0,5 mm=500 µm FOV.
Distance de travail – La distance entre le dessus de l’échantillon et le bas de l’objectif est la distance de travail. Lors de la dissection d’un petit animal, vous avez besoin d’une distance de travail plus grande que lors de l’observation de lames.
Grossissement – C’est le facteur d’agrandissement d’une image. Par exemple, un grossissement 10X fait paraître un échantillon dix fois plus grand. Plus le grossissement est élevé, plus le champ de vision est petit. Le grossissement total d’un microscope est égal au grossissement de l’oculaire multiplié par le grossissement de l’objectif.
Dioptrie – Techniquement, la dioptrie est une mesure de la valeur de correction d’une lentille. Elle est égale à l’inverse de la distance focale en mètres. Si une lentille peut faire la mise au point à 1 mètre, elle a une dioptrie de 1. Si elle fait la mise au point à 2 mètres, elle a une dioptrie de 1/2. Chaque oculaire de microscope possède un réglage de dioptrie pour permettre de faire de petites corrections à l’image, compensant la différence de vision entre les deux yeux.
Ouverture numérique (N.A.) – Ce nombre est directement lié au milieu de réfraction (air (objectif sec) = indice de réfraction 1,00 ; huile = 1,515) et à l’angle de réfraction. Un objectif à immersion dans l’huile a une N.A. plus élevée qu’un objectif sec. L’angle de réfraction est déterminé par la proximité de l’objectif par rapport à l’échantillon. Plus la N.A. est élevée, meilleure est la résolution de l’objectif ou de la lentille.
Résolution – La résolution décrit la netteté de la vue. La résolution détermine à quelle distance deux points peuvent être dans le champ de vision tout en étant perçus comme distincts.
Distance interpupillaire – C’est la distance entre les yeux de l’observateur. Pour les microscopes binoculaires, vous pouvez ajuster la distance entre les oculaires afin que l’observateur voie un seul cercle de lumière au lieu de deux lorsqu’il regarde à travers les deux oculaires.
