Placas de Insertos para Cultivo Celular con Membrana Permeable para Evaluar la Función del Tejido Epitelial/Endotelial

In vitro los modelos se utilizan comúnmente para el descubrimiento de fármacos y estudios para comprender las causas fundamentales de las enfermedades y su progresión. Las células epiteliales y endoteliales se cultivan en insertos de membrana permeable para cultivo celular con el fin de crear condiciones similares a in vivo, donde las células tienen acceso tanto en los lados apical como basolateral a medios, fluidos u otros tipos de células, en lugar de tener solo exposición apical cuando las células se cultivan directamente en placas de cultivo tisular.

La formación funcional de tejido in vitro se verifica midiendo la resistencia eléctrica transepitelial/transendotelial (TEER) mediante la tecnología EVOM™ de WPI. Se aplica una pequeña corriente eléctrica de amplitud, una onda cuadrada de CA con polaridad alternante, a las capas celulares cultivadas en insertos de membrana permeable usando un par de electrodos. Normalmente, cuanto más estrecha es la barrera, mayores son los valores de TEER.

Las células de interés se cultivan en una membrana permeable hasta formar una monocapa confluyente. Se utilizan electrodos a ambos lados de la membrana para monitorear los valores de TEER. Cuando la monocapa alcanza la confluencia, el valor de TEER aumenta bruscamente y las células están listas para pruebas adicionales.


Cómo funciona TEER

transcellular vs paracellular transport through a membrane

Los iones y la corriente eléctrica pueden transportarse a través de las células (transcelular) y a través del espacio entre células adyacentes (paracelular). Las líneas punteadas muestran la vía transcelular del flujo de iones o corriente eléctrica. Las líneas sólidas demuestran la vía paracelular del flujo de iones o corriente.

Theory of how cells grow

Inicialmente, 24 horas después de la siembra celular en el transwell, los valores de TEER suelen ser bajos, porque la corriente puede pasar fácilmente entre las células. Con el tiempo, las células se multiplican y comienzan a cubrir los espacios. Finalmente, se forma una monocapa celular confluente. En ese momento, la membrana permeable está completamente cubierta con células y no permite el paso fácil de la corriente eléctrica. Esto resulta en un valor alto de TEER.

EVOM_leaky_tight_cell_types

El tipo de célula A permite que pasen mayores cantidades de corriente e iones entre las células y produce un valor bajo de TEER. Con sus uniones más estrechas, los monocapas de células tipo B mostrarán un valor de TEER más alto. Aunque ambos monocapas están confluyentes, los valores de resistencia TEER pueden ser marcadamente diferentes según la naturaleza de las propias células.

Interpreting TEER results

A medida que aumenta el TEER, se puede observar la correlación directa con la barrera celular, la confluencia del tejido y la citotoxicidad del medio probado.


¿Por qué elegir WPI?

El EVOM de WPI se considera el estándar de oro para la medición de TEER, con numerosas citas para instrumentos fabricados por WPI, tanto modelos actuales como antiguos, incluyendo EVOM, EVOM2, ERS2, REMS, EVOM3, EVOM™ Manual, EVOM™ Auto y electrodos como STX HTS, ENDOHM, STX2 y STX4. EVOM™ ha sido una tecnología reconocida durante más de 30 años (Ver Técnicas de medición TEER para sistemas de modelos de barrera in vitro - PubMed), y ha sido citado en numerosas publicaciones revisadas por pares.

Reasons to use EVOM technology for research validation

EVOM™ Manual y EVOM™ Auto son fáciles de usar para lecturas rápidas, TEER es no invasivo y no destructivo para la célula, y te proporciona datos cuantitativos medibles sobre la salud de tu barrera.


Materiales y tamaños de placas Corning

WPI ahora ofrece insertos para cultivo celular con membrana permeable Corning® con diferentes opciones de membrana, tamaño de poro y diseño de placa. La selección del tipo de placa depende de su aplicación.

  • Las membranas de policarbonato (PC) permiten una difusión máxima. Por lo tanto, las membranas de PC son normalmente adecuadas para estudios de absorción y transporte de fármacos (por ejemplo, EVM-AC-03-C3415)
  • Las membranas transparentes de PET (poliéster o tereftalato de polietileno) pueden permitir una transparencia óptica suficiente para observar el crecimiento celular en estos insertos de membrana mediante microscopía de contraste de fase (por ejemplo, EVM-AC-03-C3460, EVM-AC-03-3470)

Los insertos para cultivo celular pueden ser transwells desmontables disponibles en formatos de placas de 6 (por ejemplo, EVM-AC-03-C3450), 12 (por ejemplo, EVM-AC-03-C3460) y 24 (por ejemplo, EVM-AC-03-C3460) pocillos. Estos insertos removibles son adecuados para estudios que no requieren alto rendimiento y para estudios donde dos o más tipos celulares diferentes necesitan crecer en ambos lados de las membranas. Los insertos para cultivo celular de 24 pocillos pueden usarse para medición automatizada de TEER utilizando el EVOM™ Auto moviendo los insertos a una placa complementaria.

WPI también ofrece placas HTS (cribado de alto rendimiento) disponibles en formatos de 24 (por ejemplo, EVM-AC-03-C3399) y 96 (por ejemplo, EVM-AC-03-C3381) pocillos. Las placas HTS tienen un ensamblaje único para el compartimento apical para todos los pocillos. Las zonas de acceso apical y basolateral están fijas en una ubicación consistente en la placa. Por lo tanto, las placas HTS permiten alto rendimiento y automatización. Por ejemplo, las placas HTS se usan comúnmente con el EVOM™ Auto de WPI para la medición automatizada de TEER.


Aplicaciones

  • Normalmente se insertan placas con tamaño de poro de membrana de 0.4 (por ejemplo, EVM-AC-03-C3391) y 1.0 (por ejemplo, EVM-AC-03-C3380) µm que se usan para estudios de transporte, permeabilidad y co-cultivo.
  • Las aplicaciones de toxicidad, interfaz aire-líquido (ALI) e ingeniería de tejidos comúnmente usan membranas de 0.4 y 3 µm (por ejemplo, EVM-AC-03-C3385). 
  • Los estudios de migración e invasión celular requieren un tamaño de poro de membrana mayor de 3, 5 (por ejemplo, EVM-AC-03-C3388), 8 µm (por ejemplo, EVM-AC-03-C3384) de los insertos de cultivo celular.  

WPI ofrece las placas de inserción para cultivo celular Corning más confiables con diferentes tipos de membrana y opciones de tamaño de poro para diversas aplicaciones, además de proporcionar la solución de medición TEER de última generación utilizando el EVOM™ de WPI para verificar el crecimiento funcional del tejido. La medición TEER es crucial para validar estudios in vitro realizados con inserciones y placas de membrana permeable.

Applications for TEER measurment

Estas son algunas de las aplicaciones populares para la medición de TEER. Sin embargo, la ingeniería de tejidos, la evaluación de la función de barrera epitelial/endotelial, la investigación con organoides y los estudios de absorción de fármacos son solo la punta del iceberg. TEER se utiliza para el cultivo celular, la modelación de enfermedades, el control de calidad en ensayos basados en células y terapias celulares, el control de calidad en la fabricación y más. Ahora, incluso es posible monitorear TEER en sistemas de órgano en un chip.


Familia de Productos EVOM™

  • evom-auto-96-transparent2

    EVOM™ AUTO - 96 POZOS

    Sistema compacto automatizado para la medición de TEER con control y registro de datos por cable e inalámbrico en placa de 96 pocillos.

  • evom-auto-24-transparent2

    EVOM™ AUTO - 24 POZOS

    Sistema compacto automatizado para la medición de TEER con control y registro de datos por cable e inalámbrico en placa de 24 pocillos.

  • evom-manual-side-transparent2

    MANUAL EVOM™

    Medidor portátil para la medición manual de TEER con registro automático de datos y pantalla táctil interactiva.

  • eva-gxp-re

    EVOM™ AUTO GXP

    Sistema automatizado de medición TEER con módulo de cumplimiento GxP que cuenta con software conforme a 21 CFR Parte 11.

Más detalles

Para obtener más detalles, consulte la guía de selección de placas de Corning aquí... Guía de Selección de Productos de Soportes Permeables

Puede ver la lista de placas insertables y opciones de medición TEER basadas en EVOM™. O simplemente contacte a WPI para discutir sus necesidades de placas de soporte permeable y soluciones de medición TEER con uno de nuestros expertos en TEER.