Secuencia de Inyección MICRO-ePUMP Explicada
Resumen del MICRO-ePUMP
Diseñado para simplificar la inyección intracelular y una variedad de otras tareas de microinyección, el MICRO-ePUMP utiliza presión de aire cuidadosamente regulada para inyectar células con fluido. Los volúmenes inyectados varían desde picolitros hasta nanolitros. El tiempo, la presión de inyección y la presión de compensación se ajustan de forma independiente mediante la interfaz táctil. Los intervalos de tiempo pueden variar desde 2 segundos hasta 10 ms o menos, dependiendo del ajuste de la presión de inyección. El intervalo de presión de inyección se activa mediante el pedal.
El MICRO-ePUMP está diseñado para inyectar cantidades muy pequeñas de fluidos, como medicamentos, en células u orgánulos pequeños. Se pueden aplicar dos presiones positivas diferentes con un circuito de temporización de precisión que cambia automáticamente entre las dos presiones.
- El puerto suministra presión positiva para la eyección de alta presión.
- El puerto de presión mantiene una baja presión positiva de “compensación” en la pipeta de inyección entre pulsos para evitar la absorción de fluido por acción capilar.
MICRO-ePORE integrado para facilitar la penetración
La tecnología MICRO-ePORE™ Pinpoint Cell Penetrator de WPI está integrada dentro del MICRO-ePUMP. Cuando el investigador activa el MICRO-ePORE™, este entrega una señal de voltaje altamente localizada en el sitio de inyección objetivo para facilitar la penetración con un trauma mínimo. El investigador determina la amplitud y frecuencia de la señal que mejor se adapta a la aplicación. La señal se origina en la caja de control y se transmite a través del cable de interfaz del electrodo al soporte del microelectrodo. Se utiliza un alambre de plata para transmitir la señal a la sustancia eléctricamente conductora que se está inyectando. Un electrodo de referencia se usa para colocar el medio a un potencial de 0.0 V con referencia al voltaje generado.
Comprendiendo la secuencia de inyección del MICRO-ePUMP
Aquí hay una infografía útil que define la secuencia de eventos que ocurren durante una inyección con MICRO-ePUMP. Varios eventos suceden casi simultáneamente. Esta infografía muestra los distintos puntos de activación y demuestra qué ocurre en cada etapa. Los eventos de activación se muestran cronológicamente en la parte inferior, y el gráfico muestra el estado de estos puntos de interés durante los eventos:
- El tipo de presión aplicada (presión de compensación o presión de inyección)
- La posición del pedal (no presionado, presionado a la mitad, completamente presionado)
- La posición de la pipeta (en solución tampón, dentro de la célula)
- Señales audibles de retroalimentación (sin sonido, tonos de aprobación o rechazo, tono de inyección)
- La aplicación de voltaje (sin voltaje aplicado, voltaje de medición de continuidad, voltaje de inyección)
Secuencia de eventos para realizar una inyección
1. Para realizar una inyección, primero posiciona la pipeta en la solución tampón. Luego, presiona el pedal hasta la mitad, a la primera posición. El pedal inicia la prueba de continuidad del circuito, que dura 400 ms. Durante esos 400 ms:
- El MICRO-ePUMP mantiene la presión de compensación para evitar la absorción de fluido por acción capilar.
- No se escucha ningún sonido durante la prueba de continuidad.
- La corriente aumenta al voltaje de medición de continuidad y luego baja al voltaje de inyección programado después de la prueba de 400 ms.
2. Inmediatamente después de que la prueba de continuidad termina, se escucha uno de dos tonos.
- Un tono grave indica que no se pudo establecer la continuidad del circuito, y debes reevaluar tu configuración antes de continuar con la inyección.
- Un tono agudo señala que la continuidad del circuito está verificada y puedes continuar.
El voltaje baja al voltaje de inyección programado tan pronto como termina la prueba. El MICRO-ePORE se activa y está listo para la penetración celular, dependiendo de los resultados de la prueba de continuidad.
3. Si la prueba de continuidad fue exitosa, puedes mover la pipeta dentro de la célula. En el punto de penetración:
- Se mantiene la presión de compensación.
- El pedal sigue presionado a la mitad.
- El tono de la prueba de continuidad sigue sonando.
- Se mantiene el voltaje de inyección, lo que significa que el MICRO-ePORE está activado.
4. Tan pronto como la pipeta penetra la célula, puedes presionar el pedal completamente (segunda posición). En ese momento:
- El MICRO-ePUMP aumenta a la presión de inyección y mantiene esa presión durante el tiempo de inyección programado.
- No se escucha ningún sonido durante la inyección.
- El voltaje del MICRO-ePORE baja a cero y permanece así hasta que comience el siguiente ciclo de inyección.
5. Cuando la inyección termina:
- La presión del MICRO-ePUMP baja a la presión de compensación.
- El pedal permanece completamente presionado.
- La pipeta permanece en la muestra.
- Se escucha un tono corto y distintivo que indica que la inyección se realizó.
6. En ese momento puedes retirar la pipeta de la muestra y todos los demás puntos de interés permanecen sin cambios.
7. Finalmente, puedes soltar el pedal. Ahora estás listo para repetir el ciclo de inyección con una nueva muestra.
Descargar infografía
El ciclo de inyección ocurre en segundos, pero la infografía muestra claramente cómo todos los eventos de activación y puntos de interés se combinan. Ver esto gráficamente puede ayudarte a familiarizarte con lo que sucede mientras realizas estos pasos durante cada inyección. Puedes descargar la infografía lista para imprimir para colocarla en tu laboratorio.
Si tienes alguna pregunta, llámanos al (866) 606-1974 (Línea gratuita en EE. UU.) o envíanos un correo electrónico a wpi@wpiinc.com.
