EVOM o Voltímetro: Definiendo la Diferencia
Un Voltímetro
Un voltímetro-ohmímetro puede aplicar un voltaje constante de corriente desconocida a través de la membrana y dañar las células eléctricamente, además de dejar un desequilibrio químico en los electrodos. WPI experimentó con dos voltímetros-ohmímetros:
- Un medidor Fluke costoso aplica un voltaje de CC de 50 a 80 mV, que (en una membrana de 1000Ω) pasará 80µA. Con una membrana de 200Ω, esto es 400µA.
- Un medidor económico emite 500 mV de CC, lo que pasará 500µA a través de la membrana. Con una membrana de 200Ω, esto es 2.5mA.
El Voltímetro Carga o Electrocuta las Células
Cuando se usa un voltímetro-ohmímetro para probar una capa celular, los electrodos de Ag/AgCl acumulan una carga química desequilibrada. Si las células no son electrocutadas en el proceso, también acumulan una carga. Los electrodos desequilibrados ahora pueden actuar como una fuente de voltaje y corriente que debe superarse para hacer una medición precisa.
Si se empleara un voltímetro-ohmímetro en una medición TEER (Resistencia Eléctrica Transepitelial) y se dejara midiendo las células por más de unos segundos, entonces el valor de la medición TEER probablemente disminuiría a medida que las células y los electrodos se alteran por el voltaje y la corriente aplicados. En un mundo ideal, un dispositivo de medición minimiza su impacto en lo que intenta medir. Estos medidores son mejores para medir resistencias fijas y circuitos.
EVOM - Perfecto para TEER
Inversión de Polaridad
El EVOM² pasa una corriente constante de 10µA a través de la membrana y revierte la polaridad 12.5 veces por segundo para que no deje carga ni en los electrodos ni en la membrana. El voltaje presente a 10µA en 1000Ω es 10mV. (Como dato adicional, incluso esto es demasiado para algunos tejidos, como la retina). Típicamente, este valor en una membrana de 200Ω es 50µV. En cualquiera de las configuraciones, es mucha menos energía para disipar en la membrana o para cargar los electrodos.
El EVOM² pasa la señal de corriente constante de 10µA a 12.5Hz a través de los dos electrodos de corriente (I1 e I2) en el STX a través de la membrana. Los electrodos compañeros (V1 y V2) miden el voltaje requerido para alcanzar la corriente de 10µA y envían esta información al procesador. El procesador convierte esto a ohmios mediante la Ley de Ohm (E=I×R) y muestra la señal en el medidor digital. Dado que la corriente está fija en 10µA, el procesador puede convertir fácilmente la medición.
Promediado Incorporado
El EVOM (un producto legado reemplazado por el EVOM2) y el EVOM² tienen incorporado un sistema de promediado para que las lecturas espurias sean “muestreadas” y eliminadas. El EVOM² tiene un conector de salida para grabación para que pueda conectarse a un registrador de datos. El sistema EVOM² requiere el uso de un líquido conductor para realizar la medición. Si los electrodos STX están en aire no conductor, la lectura es inválida. El modelo anterior tenía una alarma para indicar un electrodo roto o mediciones en aire o medios no conductores.
Estabilización de Electrodos para Balance
El EVOM² tiene una función de estabilización de electrodos incorporada en el medidor. Cuando el medidor está apagado, los electrodos V1 y V2 están en cortocircuito para que, si el investigador los coloca en un líquido conductor, esos electrodos estén balanceados a 0mV. Es decir, están “equilibrados.” Este balance de electrodos es crítico para las mediciones de potencial de membrana. No es tan crítico en las mediciones TEER, porque la electrónica del EVOM² está diseñada específicamente para compensar desequilibrios de electrodos. El EVOM² es reconocido mundialmente como un dispositivo estándar de medición para esta ciencia.
Resumen
El EVOM² mide cualitativamente la salud de monocapas celulares y cuantitativamente la confluencia celular. El EVOM² es el más adecuado para la medición TEER y la detección de confluencia de monocapas.
NOTA: El Manual EVOM™ reemplazó al EVOM2 legado.
