Electroporación vs Transfección Embrionaria en Pez Cebra
Electroporación vs Transfección Embrionaria de Pez Cebra
La electroporación es un método de transfección para introducir sustancias como ADN, ARN o material proteico en las células mediante la aplicación de un pulso eléctrico. Aunque la electroporación es un método eficaz para células como bacterianas, de levadura, mamíferas, vegetales, de insectos o células primarias, algunas células son más sensibles y este método puede afectar negativamente la viabilidad general. Por ejemplo, en una aplicación popular que involucra la transfección embrionaria de pez cebra, no se recomienda usar electroporación. Algunas razones por las que este método no es beneficioso para estos tipos de células embrionarias y su viabilidad incluyen la etapa de desarrollo del embrión, la sensibilidad del embrión y el corion del embrión.
Etapa de Desarrollo
Los embriones de pez cebra se desarrollan rápidamente, donde la gastrulación comienza aproximadamente 6 horas después de la fertilización y eclosionan después de 2 días como larvas nadadoras libres. La eficacia de la electroporación puede variar según la etapa de desarrollo de la célula. La electroporación puede ser menos eficiente en ciertas etapas del desarrollo, limitando aún más la utilidad de este método para una transfección exitosa.
Sin embargo, se ha encontrado que en la etapa de segmentación, la electroporación puede usarse de manera efectiva (Zhang, et. al. 2020). Es importante señalar que, dependiendo del material que se entregue y el resultado deseado, esta etapa de transfección de embriones de pez cebra puede no ser la más recomendable.
Sensibilidad
Los embriones de pez cebra son pequeños, frágiles y susceptibles a factores externos de estrés. Se ha encontrado que los pulsos eléctricos afectan negativamente el desarrollo y, nuevamente, la viabilidad. Su pequeño tamaño y fragilidad hacen que la electroporación sea un método arriesgado para usar en la transfección.
Corion
Los embriones de pez cebra están confinados dentro de un corion protector que actúa como una barrera para las moléculas periféricas. El corion es bastante impermeable, por lo que se requiere un voltaje más alto para abrir canales mediante electroporación, un voltaje que a menudo es perjudicial para la viabilidad celular.
Técnicas Alternativas
Los métodos alternativos para lograr una transfección exitosa incluyen la microinyección estándar basada en presión. Se ha encontrado que la transgénesis de vectores usando Tol2 u otros sistemas basados en transposones promueven una expresión estable. Un enfoque estándar de microinyección basada en presión ofrece mayor fiabilidad, precisión y control general al entregar material a los embriones, siendo a menudo preferido sobre la electroporación en estudios con pez cebra. Consulta la línea de sistemas de microinyección basados en presión de WPI para todas tus necesidades de modulación embrionaria de pez cebra.
Aunque la electroporación no es ideal para su uso en embriones de pez cebra, puede implementarse para manipular células o tejidos derivados de embriones o adultos de pez cebra en ciertos contextos de investigación. Los usuarios finales deben ser cautelosos al estructurar un protocolo que utilice electroporación para modelos de pez cebra para optimizar los resultados de su aplicación.
Referencia
Zhang, C., Ren, Z. & Gong, Z. (2020). Expresión transgénica y edición genómica mediante electroporación de embriones de pez cebra. Mar Biotechnology, 22, 644–650. https://doi.org/10.1007/s10126-020-09985-0
