Cuantificación de ADN/ARN usando DIPUV-Mini y un espectrómetro Tidas

Resumen

Las concentraciones de ADN en solución (31µg/mL y 688µg/mL) se midieron con un espectrómetro y una fuente de luz UV/VIS en un DIPUV-Mini. Debido a la longitud de camino de 2mm, el uso de un DIPUV-Mini no requiere una dilución previa a la medición dentro de este rango de concentración, eliminando así una posible fuente de error.

Procedimiento experimental

Las soluciones estándar de ADN (Sigma D1626) se prepararon gravimétricamente usando agua ultrapura de 18.2MΩ/cm como disolvente. Las soluciones se prepararon entre 0.0µg/mL y 687.6µg/mL.

Las mediciones se tomaron por triplicado usando un DIPUV-Mini. El DIPUV-Mini estaba conectado a una fuente de luz UV/VIS (WPI #D4H).

Los datos se recopilaron en incrementos de 1nm a lo largo de todo el rango del instrumento (190nm-720nm). El instrumento se configuró de modo que las mediciones de referencia arrojaran una intensidad total del 80%. Todas las mediciones utilizaron agua ultrapura de 18.2MΩ/cm como solución de referencia.

Resultados

Los resultados experimentales se presentan en la Tabla 1:

Tabla 1: Concentraciones de ADN y valores resultantes de absorbancia

Dado que la absorbancia con respecto a la concentración sigue la Ley de Beer-Lambert,

A= εlc
Los valores esperados de absorbancia se calcularon a partir de las concentraciones de la solución de ADN. Los valores de literatura de ε para dsDNA se listan como 0.020µg/ml*cm.

Los datos experimentales se pueden encontrar en la Figura 1 con las mediciones de absorbancia calculadas indicadas por una línea continua. Las mediciones de absorbancia se expresan a una longitud de onda de 260nm. La desviación del valor teórico en valores de absorbancia más altos es resultado de la interferencia de luz dispersa dentro del espectrómetro.

 Figura 1: Absorbancia medida versus teórica

Figura 2: Medición típica de ADN (281.6µg/mL)

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