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なぜTEERの測定値が不安定になるのか?原因、対処法、予防策
不安定なTEER測定値は、電極の状態や温度変化から培地のばらつきや気泡まで、さまざまな技術的および生物学的要因によって引き起こされることがあります。この記事では、研究者が測定の不一致の最も一般的な原因を特定し、安定性と再現性を向上させるための実用的な解決策を提供します。また、バリアの完全性における真の生物学的変化と不要な測定ノイズを区別する方法を明確にし、結果の解釈により自信を持てるようにします。
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TEERの理解:バリアの完全性を研究するための重要なツール
腸上皮、血液脳関門、または角膜内皮などの細胞バリアは、組織への物質の出入りを制御する上で重要です。バリアが損なわれると病気を引き起こす可能性があり、強固なバリアは健康維持に不可欠です。
私たちの体の保護バリアがどのように機能しているかを理解することは、治療の進歩や新しい療法の開発にとって非常に重要です。研究者にとって、バリアの完全性を正確に測定することは、医薬品開発から疾患モデル作成までの分野で非常に重要です。科学者がこれらのバリアを研究するために使用する最も重要なツールの一つがTEER(経上皮電気抵抗または経内皮電気抵抗)です。この強力な測定技術は、臓器や組織を保護する細胞バリアの完全性と機能に関する貴重な洞察を提供します。TEERは、培養された細胞単層の完全性と透過性を定量化するためのゴールドスタンダードで非侵襲的な技術です。
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生物医学研究におけるオルガノイド:機会と課題
オルガノイドは、幹細胞や特定の臓器や組織に存在する細胞型に分化する能力を持つ他の前駆細胞から体外で培養された、三次元の小型臓器・組織モデルです。これらは人間の臓器の構造と機能を忠実に再現しており、人間の発生過程の研究、疾患モデルの作成、創薬、個別化医療のための貴重なツールとなっています。
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細胞治療における品質管理の強化
細胞療法は再生医療の分野に革命をもたらし、さまざまな医療状態に対する有望な治療法を提供しています。細胞ベースの療法の安全性、有効性、一貫性を維持することは、臨床現場での成功に不可欠です。品質管理の手法は、開発から投与までこれらの療法の品質評価に重要な役割を果たします。本記事では、細胞療法における品質管理の現状のアプローチを探り、経上皮電気抵抗(TEER)などの機能的測定技術の活用についても紹介します。 これらの有望な治療法の品質と安全性を確保するために。
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プレスリリース:ワールドプレシジョンインスツルメンツの科学諮問委員会の紹介
フロリダ州サラソータ、2023年11月10日 /PRNewswire/ -- World Precision Instruments (WPI)、 基礎研究および医薬品開発向けの高品質な実験室用機器と装置の主要な提供者である当社は、科学諮問委員会(SAB)の設立を誇りを持って発表します。さまざまな科学分野の著名な専門家で構成されるSABは、WPIの科学研究における革新と卓越性への取り組みを導き、推進する重要な役割を果たします。
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パート7:GxPは私にとって何を意味するのか?
GxPは研究所にとって重要な枠組みであり、データの完全性、製品の安全性、規制遵守、運用効率を確保します。これらのガイドラインに従うことで、研究所は信頼性の高い研究を行い、公衆衛生を守り、科学的かつ倫理的責任の最高基準を維持できます。GxP準拠のソフトウェアを使ってコンプライアンス報告を効率化し、監査準備を簡素化することで、組織は遅延を回避し、違反による罰則のリスクを減らし、規制遵守への取り組みを自信を持って示すことができます。
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肺のインビトロモデルにおける経上皮/経内皮電気抵抗(TEER)測定の重要性
上皮細胞および内皮細胞は、選択的透過性のようなバリア機能で知られています。肺組織は上皮細胞層で構成されており、隣接する内皮層とともに肺と血液間の酸素と二酸化炭素の交換を可能にしています。現在、生物医学研究コミュニティの主要な焦点は、この新型コロナウイルス(2019-nCoV)や類似のウイルスによる感染の詳細を理解することにあります。この新しいウイルスは、肺の異物を除去する通常の清掃能力を妨げる可能性があり、肺の選択的透過性やバリア機能が著しく損なわれることがあります。炎症カスケードが開始されると、この悪影響は持続する可能性があります。
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薬物探索におけるTEER測定の応用
2022年、アメリカ食品医薬品局(FDA)は37の新薬を承認しました。そのうち20は化学物質で、17はバイオ医薬品でした。2023年も創薬は活発で、新たに開発される薬の種類の変化や、前臨床で薬を評価するために導入される新しく革新的なアッセイの結果、多くの進展が見られています。治療薬の開発は依然として効果的な治療法が不足している大規模な患者層に影響を与える疾患に重点が置かれており、2023年に最も期待される新薬の発売は、がん、アルツハイマー病、心血管疾患、潰瘍性大腸炎の分野で予想されています。
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必要なときに揃えたい実験室用品の必需品
どの研究所でも、主要な機器と同じくらい重要なのが基本的な実験用品です。信頼できる供給業者を選ぶことは、必要なときに高品質な実験用品を手に入れるのと同じくらい重要です。WPIは初期の創薬研究におけるパートナーでありたいと考えており、幅広い実験用品を在庫しており、多くは同営業日発送が可能です。さまざまな実験用品をすぐに発送できることが、私たちを信頼できる研究パートナーにしています。ここでは、今後の実験に必要な人気の実験用品の一部をご紹介します。
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網膜色素上皮細胞治療の品質管理
細胞療法は、損傷した組織の再生、正常な細胞機能の回復、あるいはがん細胞のような病的な細胞を標的にして破壊する細胞毒性細胞としての役割を果たす可能性を持ち、さまざまな医療状態の治療に有望なアプローチとして登場しています。細胞ベースの治療法および再生医療の分野が進展し続ける中で、細胞療法の品質と安全性の確保は極めて重要です。品質管理は細胞療法の製造過程で重要な役割を果たしており、経上皮電気抵抗(TEER)は、これらの治療に用いられる細胞の完全性と機能性を評価するための有用なツールとして注目されています。ここでは、変性網膜疾患に対する有望な細胞療法である網膜色素上皮(RPE)細胞の品質管理におけるTEERの活用について紹介します1。
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信頼できる実験機器サプライヤーを選ぶためのヒント
信頼できる実験機器のサプライヤーを選ぶことは、必要な機器の品質、信頼性、そして納期を確保するために非常に重要です。研究の成果がかかっているときには、実績があり、サポート体制の整った信頼できる会社が必要です。実験機器のサプライヤーを選ぶ際に考慮すべきいくつかの重要なポイントをご紹介します。
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アプリケーションノート:Celloger® Mini Plusを用いたマクロファージ細胞株の形態変化および貪食活性の観察
免疫機能を担う白血球は血管に沿って移動する懸濁細胞であるため、免疫学の研究では白血球由来のさまざまな懸濁細胞株がよく使用されます。接着細胞とは異なり、懸濁細胞を扱う場合、顕微鏡でプレートを位置決めする際のわずかな動きで細胞が浮いてしまいます。温度やCO2の不安定さによる問題に加え、従来の顕微鏡では細胞をリアルタイムで観察することは実際には不可能です。したがって、懸濁細胞を安定して観察するには、インキュベーター内で動作するCelloger® Mini Plusのようなライブセルイメージング装置が不可欠です1。さらに、Celloger® Mini Plusでは、システム内のカメラが移動して複数の位置で細胞の画像を撮影し、プレートを載せた可動ステージの代わりに細胞サンプルを安定した状態に保ちます。懸濁細胞をCelloger® Mini Plusと顕微鏡の両方で観察したところ、Celloger® Mini Plusでの撮影の方が安定しており、顕微鏡ではいくつかの細胞がピント外れになっていました(図1)。
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TEER測定に関するよくある質問
こちらは、TEER測定に関するよくある質問(FAQ)です。使用機器はEVOM2です。
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よくある質問:ENDOHMの不安定な抵抗値のトラブルシューティング
よくある質問(FAQ)の一つに、EndOhmを使ったTEER測定があります。もしENDOHMの抵抗値が安定しない場合は、トラブルシューティングが必要かもしれません。
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動画:STX4電極ブレードの交換方法
新しいSTX4電極はEVOM3と連携し、ブレードは交換可能です。EVOM3は細胞培養プレートでTEER(TER)測定を行うために使用されます。ここではブレードの交換方法を簡単にご紹介します。
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TEER測定用電極の選び方
経上皮電気抵抗(TEER)は、経上皮抵抗(TER)とも呼ばれ、細胞の健康状態を監視するために使用されます。TEERは、細胞内経路(すなわち、個々の細胞による抵抗)と細胞間経路(すなわち、細胞接合部の形成による抵抗)の測定値で構成されています。TEERは一般的に細胞のコンフルエンス(密着度)を監視するために用いられます。TEER値は、細胞単層の透過性の変化を示し、脳微小血管内皮細胞や肺胞、腎臓、腸の上皮細胞などの細胞の単層バリア機能を示します。高いTEER値は一般的に、より密着した細胞単層や細胞接合部を反映します(Lewis 1996、Matter and Balda 2003、Denker and Sabath 2011)。WPIのTEER測定システムの主な利点のいくつかを以下に示します。TEER値(電気生理学的解析)は、他の解析方法と組み合わせて生物学的現象をより深く理解することができます。例えば、TEER値の低下は単層の透過性の増加を示し、これはトレーサー分子(フルオレセイン-デキストラン)を用いたアッセイでさらに確認できます。
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動画:EndOhmチャンバーで使われる吊り下げ式と立て置き式の細胞培養インサートの違いとは
WPI EndOhm チャンバーは、WPI の EVOM2 メーターと共に使用され、TEER(経上皮電気抵抗)測定を行います。ここで Subhra が、吊り下げ型細胞培養インサートと立て型細胞培養インサートの違いを示しています。
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WPIエンドオームチャンバーのギャップ調整方法
WPIのEndOhmチャンバーは、WPIのEVOM2メーターと組み合わせてTEER(経上皮電気抵抗)測定に使用されます。各EndOhmチャンバーには、2つのチャンバー電極間の隙間を校正するための「スペーサー」ディスクが付属しています。一定の隙間を保つことで、信頼性の高い測定が可能になります。ここではSubhraがチャンバーの校正方法を紹介します。
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WPIエンドオームチャンバー内の再生電極
WPI EndOhm チャンバーは、WPI の EVOM2 メーターと共にTEER(経上皮電気抵抗)測定に使用されます。頻繁に使用すると、バックグラウンド抵抗の測定値が上昇し始めることがあります。電極にタンパク質、糖類、生物学的物質の蓄積があるため、表面を再研磨する必要があるかもしれません。ここでは、Subhra が EndOhm チャンバーの洗浄と再研磨の方法を実演しています。
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セルカルチャーインサートに対応したエンドオームチャンバーの選び方
WPIのEndOhmチャンバーは、WPIのEVOM2メーターと共に使用され、TEER(経上皮電気抵抗)を細胞培養インサートで測定します。6ウェルプレート、12ウェルプレート、24ウェルプレート用の3つのチャンバーサイズが用意されています。ここではSubhraが、使用している細胞培養インサートに合ったEndOhmチャンバーの選び方を説明します。
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STX100 電極によるTEER測定
高速スクリーニング(HTS)プロトコルの開発により、より迅速な創薬が可能となり、複数の主要な細胞培養インサートメーカーから新しいセルカルチャーフィルタープレートのラインが導入されました。これらのHTSプレートは通常、24または96個の個別の細胞培養インサートが「結合」されて一つのプレートとして扱われ、ロボット装置で操作可能です。これらの開発に対応して、WPIはHTSプレートを用いたTEER測定用の自動REMSシステムと手動電極、STX100を開発しました。
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長寿命のためのエンドームメンテナンス
EndOhm シリーズのチャンバーは、WPIのEVOM2 抵抗計または Millicell ERS と組み合わせて使用することで、培養カップ内の内皮組織の抵抗を再現性高く正確に測定するよう設計されています。EndOhm で得られる抵抗値は、よく設計されたUssing チャンバーで得られる値と一致します。