Electrodo STX4 EVOM™ con cuchillas removibles para TEER en insertos de 6.5 mm

Características

• Las hojas del electrodo son reemplazables. Tras meses o años de uso, pueden acumular depósitos procedentes de los medios o las muestras y empezar a presentar lecturas inestables. En ese caso, puede cambiar las hojas sin tener que sustituir el electrodo completo.

  NOTA: La limpieza periódica o diaria después del uso prolongará la vida útil de las hojas del electrodo.

• La punta del electrodo tiene un recubrimiento especial y no requiere cloración con lejía o hipoclorito de sodio para funcionar correctamente; además, la cloración no la afecta. La cloración era fundamental para que el modelo anterior (electrodos STX2-PLUS) mantuviera su funcionalidad.

Las puntas del electrodo STX4, la región de detección, tienen un recubrimiento especial que no requiere cloración.

• La punta del electrodo STX4 (el área de detección activa) es más corta que la del STX2-PLUS. Gracias a su recubrimiento especial, no necesita tener un área tan grande como la del STX2-PLUS. Por lo tanto, el electrodo STX4 requiere menos líquido apical (en la parte superior del inserto) y basolateral (medio de cultivo) que el STX2-PLUS para mantener las puntas del electrodo completamente sumergidas y obtener lecturas de TEER estables.

• El electrodo STX4 encaja perfectamente en insertos de cultivo celular transwell colgantes de 24 pocillos (por ejemplo, Corning 3470) y puede permanecer suspendido sobre ellos. Esto permite trabajar con las manos libres y mejora aún más la precisión de las mediciones.

• El electrodo STX4 ofrece una mayor precisión de medición, ya que su diseño, similar al del STX2-PLUS, elimina o minimiza las variaciones causadas por la posición del electrodo que se observan con el electrodo STX2 o el STX3. El electrodo STX2 o STX3 se sostiene con la mano y su diseño flexible puede inclinarse, lo que cambia la distancia entre las dos hojas del electrodo durante la medición. Es difícil obtener un valor estable y uniforme dentro del mismo grupo de muestras con un STX2 o STX3. Por lo general, quienes usan los electrodos STX2 o STX3 toman varias mediciones de la misma muestra y calculan el promedio. Con el electrodo STX4, no es necesario realizar varias mediciones de la misma muestra.

• El electrodo STX4 tiene un cable blindado, y el cuerpo metálico del electrodo también está conectado al mecanismo de blindaje. Al minimizar o eliminar las interferencias eléctricas y de los teléfonos celulares, el blindaje garantiza que las mediciones de TEER y sus lecturas sean estables (no fluctúen) y no se vean afectadas por interferencias.

Ventajas

• Hojas reemplazables – Este nuevo electrodo STX4 tiene hojas reemplazables.

• No requiere cloración – Las puntas de los electrodos tienen un recubrimiento especial, por lo que no requieren cloración (un paso de mantenimiento) para garantizar el funcionamiento correcto al medir la TEER de capas celulares, como los cultivos epiteliales. La cloración era necesaria para el STX2-PLUS.

• Se necesita menos volumen de líquido: este electrodo requiere menos líquido que el electrodo STX2-PLUS para mantener las puntas sumergidas y proporcionar lecturas estables.

• Funcionamiento sin necesidad de sujetarlo: el electrodo STX4 encaja perfectamente en placas de cultivo celular de 24 pocillos con transwells suspendidos y puede quedar colgado sobre estos transwells, lo que permite utilizarlo sin necesidad de sujetarlo.

• Mayor precisión: el electrodo STX4 ofrece una mayor precisión en las mediciones TEER porque elimina los factores de variabilidad derivados de los cambios en el espaciado y la posición de los electrodos, como ocurre con el electrodo STX2.

• Protegido de las interferencias de radiofrecuencia (RFI): este electrodo STX4 tiene un cable blindado y elimina o minimiza cualquier interferencia (de fuentes eléctricas o teléfonos móviles) que afecte a las lecturas de la medición TEER.

El electrodo STX4 se apoya en el pocillo para funcionar sin necesidad de sujetarlo, y el anillo de ajuste permite colocar las hojas del electrodo exactamente donde deben estar en el pocillo, suspendidas en la solución sin tocar la membrana ni el fondo de la placa de pocillos para cultivo celular.

NOTA: Mejore la precisión de sus mediciones TEER con el antiguo EVOM2 sustituyendo el STX2 o el STX3 por el nuevo STX4. El STX4 puede utilizarse con el EVOM2 (modelo anterior) mediante el adaptador EVM-AC-02-01-01, que se vende por separado.

Mejoras clave del STX4 respecto al STX2-PLUS

• Ahorre recursos: el STX4 necesita menos líquido.

• Ahorre tiempo: el STX4 necesita menos mantenimiento. No requiere cloración.

• A largo plazo, el STX4 resulta más rentable porque el usuario puede reemplazar las hojas del electrodo.

 

Consulte la tabla siguiente para obtener más detalles (diferencias y similitudes entre STX4 y STX2-PLUS)

Tipo	STX2-Plus	STX4
Volúmenes de líquido necesarios para obtener mediciones estables	Se requieren mayores volúmenes de líquido (medio) por muestra para mantener las regiones sensoras más largas totalmente sumergidas y obtener lecturas estables con el STX2-PLUS. Volúmenes de ejemplo: Para el transwell Corning 3470 de 24 pocillos, se necesitan volúmenes mínimos de 300 µL en la parte superior (apical) y 850 µL en la parte inferior (basolateral) para el STX2-PLUS.	Se requieren menos volúmenes de líquido (medio) por muestra para que el STX4 obtenga lecturas estables y precisas. Como las regiones sensoras del STX4 son más cortas y tienen un recubrimiento especial, el STX4 necesita menos líquido que el STX2-PLUS. El uso de menos medio con el STX4 ahorra recursos. Volúmenes de ejemplo: Para el transwell Corning 3470 de 24 pocillos, se necesitan volúmenes mínimos de 150 µl de medio apical y 500 µl de medio basolateral para el STX4.
Cloración (mantenimiento por parte del usuario) necesaria	Sí, es importante. Si se usa a diario, es necesario clorurar el electrodo sumergiendo sus puntas en hipoclorito de sodio al 3-6 % durante 10 minutos (y luego enjuagándolas con agua desionizada) para garantizar su correcto funcionamiento.	No, no es necesario. No es necesario clorurar el electrodo. (La cloruración tampoco afecta su funcionamiento). Un recubrimiento especial de las regiones de detección del electrodo garantiza su correcto funcionamiento. El usuario necesita realizar menos mantenimiento, lo que te ahorra tiempo.
Hojas reemplazables por el usuario (Estas hojas entran en contacto directo con las muestras y contienen la región de detección).	No. Las hojas no son desmontables.	Sí. Tienes la opción de cambiar las hojas, lo que hace que el STX4 sea más rentable a largo plazo.
Aplicación	• Ideal para placas de cultivo celular transwell de 24 pocillos. • Se utiliza para mediciones de resistencia y milivoltios.	Igual que STX2-PLUS
Conexión directa con EVOM Manual o con una versión anterior del EVOM3	Sí	Sí
Compatibilidad con EVOM2, EVOM, Millicell ERS-2 y ERS (usando el adaptador EVM-AC-02-01-01)	Sí	Sí

 

 

Documentos

Manual de instrucciones del electrodo STX4 con hojas reemplazables

Tablas de compatibilidad de insertos y placas de pocillos

Vídeo

7 razones para actualizar tus electrodos EVOM: presentamos el nuevo STX4

 

 

Cómo reemplazar las hojas del electrodo STX4 para usarlo con el EVOM3

 

Preguntas frecuentes

¿Las puntas de las hojas del electrodo STX4 tienden a oscurecerse con el uso o durante el almacenamiento?

Sí, es un proceso normal. Las puntas del electrodo STX4 tienden a oscurecerse (estéticamente), pero esto no afecta el funcionamiento del electrodo ni de la hoja del electrodo.

¿Puede haber una diferencia significativa entre el color de las puntas de las hojas del electrodo STX4 en el lado externo y en el lado interno?

Sí, es normal (estético) y puede atribuirse al recorrido de la corriente entre las dos hojas del electrodo. Por lo general, las puntas del lado externo de las hojas del electrodo tienden a oscurecerse más, ya que los electrodos externos participan en la aplicación de corriente eléctrica desde el EVOM (Fig. 29). El lado interno de las puntas de las hojas del electrodo tiende a permanecer relativamente blanquecino (color de la punta), ya que no pasa corriente eléctrica por ese lado. Estos electrodos internos (el lado interno de las puntas de las hojas del electrodo) participan en la detección del cambio (voltaje) en respuesta a la corriente aplicada. Esta diferencia o falta de uniformidad observada en el color de las puntas (lado interno frente al externo) no afecta el funcionamiento real de la hoja del electrodo ni del electrodo.   

El oscurecimiento de la punta del electrodo STX4 y una diferencia de color significativa entre los lados interno y externo de las hojas del electrodo (durante el almacenamiento o después de un período de uso) se consideran normales.

NOTA: WPI acondiciona especialmente todas las hojas de los electrodos de forma individual (sobre todo las puntas) y verifica el funcionamiento adecuado de cada hoja de electrodo fabricada y del electrodo STX4.

¿Por qué aparecen guiones o lecturas inestables en EVOM Manual, aunque tenga el electrodo STX4 dentro de la muestra?

Un electrodo en el aire o parcialmente sumergido en el líquido puede mostrar guiones porque registra lecturas inestables. La punta del electrodo (la región sensora) debe permanecer completamente sumergida. También puede notar lecturas inestables si la punta del electrodo no está completamente sumergida. Asegúrese de elegir volúmenes apicales y basolaterales que mantengan las puntas de ambas hojas del electrodo completamente sumergidas. 

Gire el anillo de ajuste de longitud en el sentido de las agujas del reloj para que las hojas del electrodo puedan penetrar más profundamente en la muestra y las puntas del electrodo puedan permanecer completamente sumergidas en los líquidos. 

La longitud expuesta de las hojas del electrodo STX4 se puede ajustar girando el anillo de ajuste.

Asegúrese de que las puntas sensoras de ambas hojas del electrodo permanezcan completamente sumergidas en un líquido conductor (medio de cultivo celular o tampón) durante la medición. Debe haber volúmenes apicales y basolaterales adecuados para obtener una lectura estable.

¿Es necesario limpiar el electrodo a diario?

Sí, es fundamental limpiarlo después de cada uso diario, dejarlo secar al aire y guardarlo en un lugar seco. Esto es necesario para prolongar la vida útil funcional de las hojas del electrodo. Consulte la sección MANTENIMIENTO del manual de instrucciones del STX4 para obtener más información.

¿WPI recomienda alguna otra instrucción para manipular el electrodo?

1. Levante siempre el electrodo por el cuerpo, nunca por el cable. Esto puede romper gradualmente las conexiones internas.

   	A. NO sostenga el electrodo por el cable. (Manipulación incorrecta)
   	B. Sostenga el electrodo por la parte de plástico indicada por la flecha roja. (Manipulación correcta)

2. Limite la inmersión en líquido o el nivel de líquido pulverizado a un punto por debajo del nivel máximo indicado por las flechas en la imagen de abajo. Evite que el líquido entre y llegue hasta los cables o conectores. Puede limpiar el resto del electrodo con una toalla de papel rociada con isopropanol o etanol. (No lo rocíe directamente).

   La inmersión en líquido debe limitarse a esta línea desde la punta (máximo). El resto del electrodo se puede limpiar con una toalla de papel húmeda.

¿Mis insertos o transwell son compatibles con el electrodo STX4?

El electrodo STX4 funciona de manera óptima con los insertos colgantes de 24 pocillos de uso común (como los de Corning, Millipore y Greiner). El electrodo se puede usar con la mayoría de los demás insertos de 24 pocillos y con los de 12 pocillos. Para los insertos de 12 pocillos, es necesario sostener el electrodo con la mano durante la medición. La lista de insertos compatibles se puede consultar aquí o en «APÉNDICE B: INSERTOS Y PLACAS COMPATIBLES» del manual de instrucciones del STX4.

¿Aumentar o cambiar los volúmenes de líquido de las muestras puede cambiar mis valores de resistencia?

Sí. Puede esperar que cambien los valores de resistencia bruta. Sin embargo, debe restar los valores en blanco (un transwell en blanco sin células) de los valores de las muestras (transwell con células). De esta manera, se resta el valor en blanco con el volumen aumentado de las muestras con el volumen aumentado. Así, se omite cualquier cambio en la resistencia debido al aumento de volumen. Use siempre los mismos volúmenes para todas las muestras de un experimento.

¿La resistencia eléctrica y la resistencia eléctrica transepitelial (TEER) son lo mismo?

No. Multiplique la resistencia medida por el área de superficie adecuada de la membrana para calcular la TEER. Por ejemplo, si un inserto de 6.5 mm (placa de 24 pocillos) mide 565 Ω, la TEER es:

 565 Ω × 0.33 cm² = 186.45 Ω-cm²

[Para una placa de 24 pocillos (inserto de 6.5 mm), el área = 0.33 cm²; y para una placa de 12 pocillos (inserto de 12 mm), el área = 1.13 cm². Consulte las especificaciones técnicas del fabricante del inserto/transwell específico (por ejemplo, Millipore, Corning, etc.) para encontrar información precisa sobre el área de membrana correspondiente a un número de referencia específico del inserto.] 

¿Puede sugerir algunos parámetros experimentales que se puedan controlar para obtener resultados de TEER más uniformes?

• Se sabe que la temperatura afecta los valores de TEER. Recomendamos mantener una temperatura constante en las muestras para obtener valores uniformes. Sugerimos sacar de la incubadora la placa de pocillos con los insertos que contienen células y dejar que se estabilice a temperatura ambiente dentro de la campana de flujo laminar durante 15-20 minutos antes de tomar las mediciones. Para entonces, todas las muestras estarán aproximadamente a la misma temperatura ambiente.

• Después de añadir líquidos a los transwell, espere 15 minutos antes de tomar las mediciones. Los niveles de líquido dentro y fuera del inserto tenderán a alcanzar la misma altura o nivel, lo que proporcionará una mayor estabilidad de las lecturas. 

• Recomendamos usar el mismo líquido conductor con la misma concentración iónica tanto en el lado apical (parte superior del inserto de cultivo celular) como en el basolateral (parte inferior del inserto). Por ejemplo, use el mismo medio tanto dentro como fuera del inserto. 

• La aplicación de volúmenes uniformes de líquido (medio/tampón) durante todos los experimentos reduce la variabilidad.